發(fā)布時間：2017-05-25 12:30

  本文關鍵詞：轉錄因子SOX2對體外血管生成能力的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:血管生成,是從已有血管生成新血管的過程,主要步驟包括血管內皮細胞的增殖、遷移及管狀血管結構的形成。在胚胎發(fā)育過程中,血管生成促進胎兒循環(huán)系統(tǒng)的建立。在傷口愈合過程中,血管生成促進組織的修復和再生。病理情況下,如腫瘤,血管生成促進腫瘤的生長和轉移。所以針對血管生成的研究對相關疾病的治療非常重要。尤其在腫瘤治療中,針對腫瘤血管作為治療靶點的藥物已在臨床廣泛應用。SOX(SRY-related HMG box)是一類性別決定基因SRY(sex-determining region of the Y chromosome)相關基因家族,編碼一系列SOX家族的轉錄因子。該蛋白家族擁有高度保守的DNA結合域,被稱為HMG(high-mobility-group)box域,該結構域包含約80個氨基酸。SOX2(SRY-related high-mobility-group box 2)為SOX家族轉錄因子成員之一,屬于SOX家族的B組。轉錄因子SOX2能夠結合在基因上游特異核苷酸序列上,調控基因的轉錄。SOX2發(fā)揮多種作用:SOX2是最初被用于從成纖維細胞獲得誘導型多能干細胞的關鍵轉錄因子之一;SOX2對維持胚胎干細胞的自我更新與多向分化起關鍵作用;可以調控神經發(fā)育,以及調控晶狀體和味蕾的發(fā)育等。SOX2在大多數(shù)腫瘤中高表達,且已被廣泛證實與腫瘤細胞的增殖與轉移侵襲等多種生物學行為存在密切關系。在正常血管以及內皮細胞來源的血管內皮細胞瘤中,SOX2存在差異表達。作為重要的轉錄因子,SOX2是否參與調控血管生成過程?因人臍靜脈內皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC)可代表人體內絕大多數(shù)血管內皮細胞代謝和對外界生理、毒理反應的特征,故HUVEC已被許多研究者作為內皮細胞模型。本研究以HUVEC為研究對象。方法:應用脂質體轉染的方法,構建高表達SOX2的HUVEC;應用細胞免疫熒光法檢測SOX2的表達及定位;應用RT-q PCR檢測SOX2 m RNA水平;Western Blot法檢測蛋白水平,確定高表達是否成功。應用CCK-8、Ed U法檢測HUVEC細胞增殖能力;流式細胞術檢測細胞周期;劃痕實驗和Transwell小室法檢測細胞遷移能力;matrigel膠實驗檢測細胞成管能力。結果:1.脂質體轉染pc DNA3.0-SOX2質粒構建高表達SOX2的HUVEC(SOX2+),對照組為脂質體轉染pc DNA3.0質粒構建的空載體HUVEC(Empty Vector,EV);細胞免疫熒光方法染色定位SOX2表達在細胞核,SOX2+組與EV組細胞SOX2熒光陽性率無統(tǒng)計學差異;SOX2+組與EV組SOX2熒光強度分別為82.6%和2.9%,有統(tǒng)計學差異(P0.001);利用RT-q PCR、Western Blot分別在m RNA、蛋白水平進行驗證,與EV組對比,SOX2+組在m RNA、蛋白水平均增高。2.CCK-8檢測,與EV組相比,SOX2+組細胞增殖能力提高,有統(tǒng)計學差異(P0.05);Ed U法檢測,EV組的細胞陽性率小于20%,SOX2+組細胞陽性率近30%,有統(tǒng)計學差異(P0.05);流式細胞術檢測細胞周期,相較于EV組增殖指數(shù)53.62%,SOX2+組增殖指數(shù)約55.45%,有統(tǒng)計學差異(P0.05)。3.劃痕實驗檢測HUVEC遷移能力,在12h觀察點,SOX2+組細胞遷移指數(shù)為1.27,顯著高于EV組,有統(tǒng)計學差異(P0.01);在24h的觀察點,SOX2+組細胞遷移指數(shù)為1.75,顯著高于EV組,有統(tǒng)計學差異(P0.001);利用Transwell小室結晶紫染色觀察到HUVEC遷移進入下室,統(tǒng)計遷移細胞數(shù)目,SOX2+組遷移細胞數(shù)目相比EV增多,有統(tǒng)計學差異(P0.01)。4.matrigel膠實驗檢測HUVEC成管能力,SOX2+組小管節(jié)點為25±5,相比EV組18±3增高,有統(tǒng)計學差異(P0.05);SOX2+組小管總長度為341μm,相比EV組284μm增高,有統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論:轉錄因子SOX2可以促進HUVEC細胞增殖、遷移及管道形成能力,提示SOX2在體外血管生成中發(fā)揮重要作用。
【關鍵詞】：血管生成 人臍靜脈內皮細胞 SOX2
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R54
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文縮略詞表9-12
• 第1章 文獻綜述12-18
• 第2章 實驗材料與方法18-31
• 2.1 實驗材料和儀器18-19
• 2.1.1 主要儀器及耗材18
• 2.1.2 主要試劑18-19
• 2.2 實驗方法19-31
• 2.2.1 HUVEC細胞培養(yǎng)19-20
• 2.2.2 質粒的擴增和提取20-21
• 2.2.3 脂質體轉染21
• 2.2.4 細胞免疫熒光21-22
• 2.2.5 RNA提取以及RT-q PCR分析22-24
• 2.2.6 蛋白提取以及Western Blot分析24-26
• 2.2.7 CCK-8 檢測細胞增殖26
• 2.2.8 Ed U檢測細胞增殖26-27
• 2.2.9 流式細胞術檢測細胞周期27-28
• 2.2.10 劃痕實驗檢測細胞遷移28
• 2.2.11 Transwell小室檢測細胞遷移28-29
• 2.2.12 管道形成實驗29-30
• 2.2.13 統(tǒng)計學分析30-31
• 第3章 實驗結果31-41
• 3.1 HUVEC中SOX2的表達31-32
• 3.1.1 形態(tài)學特征31
• 3.1.2 HUVEC中SOX2的表達量31-32
• 3.2 制備高表達SOX2 HUVEC32-34
• 3.2.1 HUVEC中SOX2表達的定位32-33
• 3.2.2 高表達SOX2 HUVEC鑒定33-34
• 3.3 高表達SOX2 HUVEC細胞增殖、遷移、成管能力鑒定34-41
• 3.3.1 細胞增殖能力鑒定34-37
• 3.3.2 細胞遷移能力鑒定37-39
• 3.3.3 細胞成管能力鑒定39-41
• 第4章 討論41-44
• 第5章 結論44-45
• 參考文獻45-50
• 作者簡介及攻讀碩士期間的研究成果50-51
• 致謝51

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王淑美,徐曉玉,張文亮;調控血管生成中藥的研究現(xiàn)狀[J];時珍國醫(yī)國藥;2004年09期

2 王國慶,易成,周宏遠;因特網(wǎng)上的血管生成研究資源[J];中國微循環(huán);2004年04期

3 練燕;抑制血管生成:第五類抗癌療法?[J];國外醫(yī)學.護理學分冊;2004年10期

4 金艷,王秀琴;血管生成與抗血管生成策略[J];食品與藥品;2005年09期

5 賈林,袁世珍;腫瘤抗血管治療現(xiàn)狀與血管生成抑制-細胞毒療法[J];廣州醫(yī)學院學報;2000年02期

6 方全;血管生成素與腫瘤新生血管生成[J];國外醫(yī)學(生理、病理科學與臨床分冊);2001年05期

7 曹健,郭德玉,張恩娟;血管生成與疾病治療[J];中國藥房;2001年07期

8 王國慶,易成;血管形成新方式——擬血管生成[J];國外醫(yī)學(腫瘤學分冊);2003年04期

9 鄒戈;腫瘤血管生成與抗血管生成研究進展[J];國外醫(yī)學.泌尿系統(tǒng)分冊;2003年01期

10 張?zhí)祜w,蔣登金,郭光金;血管內皮生長因子與血管生成的研究進展[J];局解手術學雜志;2003年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬強;陳剛;徐曉玉;;中藥對血管生成影響研究進展[A];全國第3屆臨床中藥學學術研討會論文集[C];2010年

2 林秀坤;;新生血管生成與靶向抗腫瘤海洋藥物的研制策略[A];2007年全國生化與生物技術藥物學術年會論文集[C];2007年

3 戰(zhàn)忠利;孫蕾娜;孫慧;賈春實;;肺癌血管生成與血管生成抑制物之間相互關系的研究[A];第四屆中國腫瘤學術大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學術會議論文集[C];2006年

4 戰(zhàn)忠利;;肺癌血管生成與血管生成抑制物之間相互關系的研究[A];中華醫(yī)學會病理學分會2006年學術年會論文匯編[C];2006年

5 劉麗華;易愛純;;抗血管生成與血管依賴性實體瘤的治療[A];2009年中國藥學大會暨第九屆中國藥師周論文集[C];2009年

6 劉麗華;易愛純;;抗血管生成與血管依賴性實體瘤的治療[A];2010年中國藥學大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

7 李平;王國慶;;血管靶向及抗血管生成聯(lián)合放射治療的研究進展[A];第一屆中國腫瘤靶向治療技術大會論文集[C];2003年

8 卞修武;;癌癥和慢性炎癥血管生成的調控差異及其治療學意義[A];第三屆中國腫瘤學術大會教育論文集[C];2004年

9 李龍江;溫玉明;王昌美;陳江;;抑制血管生成誘導腫瘤細胞凋亡的實驗研究[A];第一屆全國口腔頜面部腫瘤學術會議論文匯編[C];2001年

10 沈明秀;王凱;蔡連香;岳開琴;張樹成;李巧風;陳秋梅;;試探中醫(yī)血足則子宮易于容物的內涵實驗之一血管生成[A];全國第六屆中西醫(yī)結合婦產科學術會議論文及摘要集[C];2002年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王迪;血管生成藥等待發(fā)力[N];醫(yī)藥經濟報;2007年

2 丁志山 沃興德;中藥對血管生成影響的研究進展[N];中國醫(yī)藥報;2003年

3 徐蓓;血管生成：從藥用植物到血管的研究 Angiogenesis:From Plants to Blood Vessels[N];中國醫(yī)藥報;2006年

4 白冰　編譯;癌細胞血管生成學說有新變化[N];中國醫(yī)藥報;2008年

5 劉道安;抑制肺癌血管生成“餓死”癌細胞[N];中國醫(yī)藥報;2002年

6 徐峰;腫瘤與血管生成息息相關[N];醫(yī)藥經濟報;2001年

7 記者劉道安;中藥對肺癌血管生成有抑制作用[N];中國中醫(yī)藥報;2002年

8 記者 白毅;miRNA在多糖介導的血管生成抑制中起重要作用[N];中國醫(yī)藥報;2014年

9 漁陽;抗血管生成類藥物：有前瞻性的暴利領域[N];醫(yī)藥經濟報;2006年

10 徐峰;腫瘤與血管生成息息相關[N];醫(yī)藥經濟報;2001年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王付海;T7肽通過下調Ang-2表達及聯(lián)合3-MA發(fā)揮其抗血管生成的實驗研究[D];山東大學;2015年

2 向勁松;基于轉基因斑馬魚模型的清熱解毒類中藥抗血管生成篩選及對照研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2015年

3 劉建昆;IL-17在結直腸癌血管生成中的作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2011年

4 王心華;力達霉素和大黃素的抗血管生成和抗轉移作用及其機制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2001年

5 張彥民;塔斯品堿抑制血管生成的作用及初步機制研究[D];西安交通大學;2008年

6 董豪杰;血管生成素對miR-141的調控作用及其在血管生成中的功能[D];浙江大學;2014年

7 王婷;咖啡酸苯乙酯抗氧化、促氧化及抗血管生成相關機制的研究[D];蘭州大學;2007年

8 房長存;基質金屬蛋白酶8在血管生成中的作用機制研究[D];山東大學;2013年

9 甄紅英;抗腫瘤抗生素C1027抑制血管生成和腫瘤轉移及其作用機制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1997年

10 朱珂;ATF4調節(jié)骨血管生成的作用和機制的研究[D];南開大學;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉玉芝;含硒復合物對犬乳腺腫瘤細胞CTM1211的生長抑制和血管生成相關因子的調節(jié)作用[D];華中農業(yè)大學;2015年

2 榮倩倩;參芪抑瘤方對荷瘤小鼠H_(22)肝癌的抑制作用及抗血管生成機制研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學(原名：甘肅中醫(yī)學院);2015年

3 閆鍇;血管生成素-2（Angiopoietin-2）調節(jié)小鼠下肢缺血血管生成的研究[D];四川醫(yī)科大學;2015年

4 于玲;遠隔預處理對大鼠腦缺血后血管生成及其相關因子表達影響的研究[D];復旦大學;2014年

5 陳士雯;MiR-494調控蛻膜MSCs影響子癇前期發(fā)病的機制研究[D];南京大學;2015年

6 丁s，

本文編號：393770