目的:通過觀察不同濃度尿酸對原代培養(yǎng)的乳鼠心臟成纖維細(xì)胞(CFs)增殖情況、膠原合成及炎性分泌的影響,以及microRNA-155(miR-155)在其中的作用,探討尿酸誘導(dǎo)心肌纖維化的分子機制,為心肌纖維化提供新的靶向治療方案。方法:⑴CFs的分離培養(yǎng):取2³ d的Wistar大鼠乳鼠在無菌環(huán)境下取出心臟,剪取心室并剪成大小約1mm³的碎塊,用胰蛋白酶消化吹打為細(xì)胞懸液,在細(xì)胞培養(yǎng)箱中通過差速貼壁法獲取CFs。⑵MTT檢測:取CFs培養(yǎng),狀態(tài)良好時,接種于96孔板培養(yǎng)24h,給予不同濃度的尿酸(200、400、600、800μmol/L)刺激,分別作用24h,用MTT法檢測不同濃度尿酸對CFs的增殖情況的影響。⑶羥脯氨酸檢測:取CFs培養(yǎng),狀態(tài)良好時,接種于6孔板培養(yǎng)24h,給予不同濃度的尿酸(200、400、600、800μmol/L)刺激,分別作用24h,用羥脯氨酸法檢測膠原蛋白含量。⑷ELISA檢測:取CFs培養(yǎng),狀態(tài)良好時,接種于6孔板培養(yǎng)24h,給予不同濃度的尿酸(200、400、600、800μmol/L)刺激,分別作用24h,...

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圖1乳鼠CFs注:倒置顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)觀察

圖1乳鼠CFs注:倒置顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)觀察2不同濃度尿酸對CFs增殖情況的影響不同濃度尿酸作用24h后，MTT法檢測CFs增殖情況，200μmol/L尿酸組與對照組相比無顯著性差異，400μmol/L、600μmol/L、800μmol/L與正常組相比....

圖2尿酸對CFs增殖情況的影響

圖1乳鼠CFs微鏡下細(xì)胞形態(tài)觀察度尿酸對CFs增殖情況的影響度尿酸作用24h后，MTT法檢測CFs增殖情況，200μmol/L顯著性差異，400μmol/L、600μmol/L、800μmol/L與正常組相﹤0.05），在200～600μmol/L濃度范....

圖3尿酸對CFs膠原合成的影響

圖3尿酸對CFs膠原合成的影響Fs不同濃度的尿酸(200、400、600、800μmol/L)刺激，分別作用24h，羥尿酸刺激后CFs膠原蛋白含量升高。（n=3*P<0.05vs對照，**P<0.01度尿酸對CFs炎性分泌的影響度尿酸作用24h后，....

圖4尿酸對CFs炎性分泌的影響

14圖4尿酸對CFs炎性分泌的影響Fs不同濃度的尿酸(200、400、600、800μmol/L)刺激，分別作用24h，E，各組CFsIL-6（A）、IL-1β（B）、TNF-α（C）的含量均顯著增加。（P<0.01vs對照）

本文編號：3919179