背景:在急性心肌梗死期間,心肌組織的主要損傷是由初始缺血和隨后的再灌注損傷引起的。對于心肌缺血再灌注損傷的病理學(xué)存在各種解釋,但氧化應(yīng)激已被廣泛接受為其中的重要因素之一。在氧化應(yīng)激過程中起主要作用的是活性氧自由基,其過量產(chǎn)生首先會破壞線粒體功能并直接影響能量代謝,最終導(dǎo)致心肌功能的喪失。但近些年來研究證實,適量活性氧的產(chǎn)生可激活蛋白激酶D,減輕心肌缺血再灌注損傷,但具體作用機(jī)制尚不明確。目的:初步闡明蛋白激酶D在線粒體氧化應(yīng)激水平對H9c2心肌細(xì)胞凋亡過程中的作用。方法:1.用不同濃度的H₂O₂(25、50、100、200、400umol/L)作用于H9c2心肌細(xì)胞,CCK-8法檢測細(xì)胞增殖活性,計算細(xì)胞存活率,選擇細(xì)胞存活率在60%左右的H₂O₂濃度建立氧化應(yīng)激損傷模型。2.將H9c2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為4組,正常對照組(Control組)、H₂O₂模型組、CRT0066101(5umol/L)預(yù)處理+H₂O₂模型...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
    1.1 研究背景及意義
    1.2 綜述
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑及耗材
        2.1.3 主要儀器及設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 相關(guān)試劑的配制
        2.2.2 H9c2 心肌細(xì)胞的體外培養(yǎng)
        2.2.3 實驗設(shè)計及分組
        2.2.4 CCK-8 法檢測不同濃度H2O2對H9c2 心肌細(xì)胞活性的影響
        2.2.5 光學(xué)顯微鏡下觀察H9c2 心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
        2.2.6 DCFH-DA及熒光顯微鏡觀察各組H9c2 心肌細(xì)胞內(nèi)ROS的表達(dá)
        2.2.7 Rhodamine123熒光染色觀察各組H9c2心肌細(xì)胞線粒體膜電位的變化
        2.2.8 DCFH-DA及流式細(xì)胞術(shù)檢測各組H9c2 心肌細(xì)胞內(nèi)活性氧水平
        2.2.9 Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記法及流式細(xì)胞術(shù)檢測H9c2 心肌細(xì)胞凋亡率
        2.2.10 Western blot法檢測各組細(xì)胞p-PKD、PKD、Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3 蛋白表達(dá)
    2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 H9c2 心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
    3.2 CCK-8 法檢測不同濃度H2O2對H9c2 心肌細(xì)胞活性的影響
    3.3 DCFH-DA法檢測各組H9c2 心肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平
    3.4 Rhodamine123 檢測各組H9c2 心肌細(xì)胞線粒體膜電位變化
    3.5 Annexin V-FITC法及流式細(xì)胞術(shù)檢測各組H9c2 心肌細(xì)胞凋亡率
    3.6 Western blot法檢測各組細(xì)胞p-PKD、PKD、Bax、Bcl-2、CleavedCaspase-3 蛋白的表達(dá)
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3915211