研究目的近年來,世界上糖尿病(diabetes mellitus,DM)患病率急劇上升,DM對人類的生命健康造成了嚴重威脅,其中引起糖尿病患者死亡的主要原因之一是心血管并發(fā)癥。糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)是糖尿病心血管并發(fā)癥中公認的一種獨立、特異的心肌病,與糖尿病患者發(fā)生心力衰竭和死亡率升高緊密相關。心肌纖維化(myocardial fibrosis,MF)又是DCM的主要病理改變之一,心肌成纖維細胞的過度增殖以及基質蛋白和膠原纖維大量合成是導致MF的主要原因。本課題通過檢測1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)大鼠心肌組織中F框/WD-40域蛋白(F-box/WD repeat-containing protein7,FBXW7)和Rho A/Rho激酶信號通路的變化,并通過慢病毒轉染人心肌成纖維細胞(Human cardiac fibroblast,HCFB),進一步測定在高糖培養(yǎng)的HCFB細胞中干預FBXW7表達對Rho A/Rho激酶信號通路的影響,明確FBXW7通過Rho A/Rho激酶信號通路調(diào)控M...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
研究生導師及課題指導小組成員介紹
主要符號表
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 糖尿病心肌病
    1.2 心肌纖維化
    1.3 氧化應激
    1.4 RhoA/Rho激酶信號通路在DM大鼠心肌損傷中的研究進展
    1.5 FBXW7的研究進展
    1.6 本課題研究目的和意義
第二章 FBXW7及RhoA/Rho激酶信號通路在DCM中的變化
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 試劑
        2.1.3 主要試劑配制
        2.1.4 主要儀器設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 動物模型的建立
        2.2.2 血糖監(jiān)測
        2.2.3 心肌標本采集及保存
        2.2.4 蘇木素-伊紅(HE)染色法
        2.2.5 Masson三色染色法
        2.2.6 堿水解法法檢測心肌組織中羥脯氨酸(HYP)含量
        2.2.7 Elisa法檢測血清中FBXW7、TGF-β1、CTGF含量
        2.2.8 血清中SOD和MDA含量測定
        2.2.9 免疫組織化學法(IHC)
        2.2.10 Western blotting(WB)
        2.2.11 統(tǒng)計學分析
    2.3 實驗結果
        2.3.1 糖尿病大鼠模型建立狀況
        2.3.2 糖尿病大鼠體重、心臟各指標及FBG水平的測定結果
        2.3.3 糖尿病大鼠心肌組織的HE染色結果
        2.3.4 糖尿病大鼠心肌組織的Masson染色結果
        2.3.5 糖尿病大鼠心肌組織的膠原含量
        2.3.6 糖尿病大鼠血清中的FBXW7、TGF-β1、CTGF含量
        2.3.7 糖尿病大鼠血清中的SOD活力和MDA含量
        2.3.8 糖尿病大鼠心肌組織的免疫組化結果
        2.3.9 糖尿病大鼠心肌組織中FBXW7、RhoA及 ROCK1 蛋白表達量變化
    2.4 討論
第三章 FBXW7調(diào)控RhoA/Rho激酶信號通路對糖尿病心肌纖維化的影響
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細胞株
        3.1.2 基因干擾序列
        3.1.3 試劑及材料
        3.1.4 主要儀器設備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)及分組
        3.2.2 建立穩(wěn)定轉染過表達或干擾FBXW7 細胞株
        3.2.3 qRT-PCR檢測細胞內(nèi)FBXW7、RhoA、ROCK1 mRNA水平
        3.2.4 Western blotting檢測細胞內(nèi)FBXW7、RhoA、ROCK1蛋白表達
        3.2.5 消化法檢測細胞內(nèi)羥脯氨酸(HYP)含量
        3.2.6 Elisa法檢測細胞內(nèi)TGF-β1、CTGF含量
        3.2.7 細胞內(nèi)SOD、MDA含量的檢測
        3.2.8 統(tǒng)計學分析
    3.3 實驗結果
        3.3.1 慢病毒轉染人心肌成纖維細胞的情況
        3.3.2 干預FBXW7表達對RhoA、ROCK1 mRNA水平的影響
        3.3.3 干預FBXW7表達對RhoA、ROCK1蛋白表達的影響
        3.3.4 干預FBXW7表達對細胞內(nèi)膠原含量的影響
        3.3.5 干預FBXW7表達對細胞內(nèi)TGF-β1、CTGF含量的影響
        3.3.6 干預FBXW7表達對細胞內(nèi)SOD、MDA含量的影響
    3.4 討論
結論
參考文獻
致謝
附錄



本文編號：3911767