目的研究miR-223對血管炎癥和動(dòng)脈粥樣硬化的影響,為臨床動(dòng)脈硬化性疾病提供新的診療方向。方法 miR-223敲除鼠與ApoE敲除鼠(ApoE KO)繁殖制備miR-223/ApoE雙敲鼠(miR-223/ApoE DKO);檢測小鼠血漿脂質(zhì)水平;處死取材后檢測主動(dòng)脈根部及血管全長的斑塊含量;通過免疫組化檢測斑塊的炎癥細(xì)胞浸潤;轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序分析血管中炎癥相關(guān)基因的表達(dá);結(jié)合microRNA靶基因數(shù)據(jù)庫尋找并驗(yàn)證其可能的靶基因。結(jié)果 miR-223/ApoE雙敲鼠主動(dòng)脈根部及血管全長斑塊量顯著增加(P<0.05)。免疫組化染色顯示,主動(dòng)脈根部炎癥細(xì)胞浸潤增加;血管轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序發(fā)現(xiàn)炎癥相關(guān)基因血管細(xì)胞黏附分子1(VCAM-1)、白細(xì)胞介素1α(IL-1α)等在雙敲鼠中顯著上調(diào)。通過靶基因數(shù)據(jù)庫篩選,發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素6(IL-6)是miR-223的靶基因并且在雙敲鼠的血管中表達(dá)顯著上調(diào);使用miR-223模擬物刺激成纖維細(xì)胞,顯著抑制了IL-6的表達(dá)。結(jié)論 miR-223抑制靶基因IL-6的表達(dá)降低炎癥反應(yīng),敲除miR-223顯著升高血管炎癥水平促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

圖1.ApoEKO小鼠和miR-223/ApoEDKO小鼠動(dòng)脈粥樣硬化情況的比較

與ApoEKO小鼠比較,miR-223/ApoEDKO小鼠miR-223含量幾乎檢測不到,證實(shí)miR-223敲除成功(圖1A)。miR-223/ApoEDKO小鼠和ApoEKO小鼠普通飼料喂飼6個(gè)月,與ApoEKO小鼠比較,DKO小鼠主動(dòng)脈全長斑塊油紅O染色面積增多(圖....

圖2.ApoEKO小鼠和miR-223/ApoEDKO小鼠血漿脂質(zhì)水平

血漿脂質(zhì)水平是影響動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展的關(guān)鍵因素,因此檢測了miR-223/ApoEDKO小鼠及ApoEKO小鼠的非禁食血漿生化指標(biāo)。結(jié)果顯示,miR-223/ApoEDKO小鼠呈現(xiàn)高膽固醇血癥,血漿膽固醇水平為514.8±21.42mg/dL,但與ApoEKO小鼠(517....

圖3.ApoEKO和miR-223/ApoEDKO小鼠炎癥細(xì)胞標(biāo)志物Mac2及平滑肌標(biāo)志物SM22染色結(jié)果的比較(免疫組化)

miR-223主要由免疫細(xì)胞產(chǎn)生,是調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵microRNA[12]。因此,進(jìn)一步檢查miR-223敲除對血管炎癥的影響。通過斑塊免疫組化染色,發(fā)現(xiàn)DKO小鼠斑塊中Mac2染色增加,提示炎癥細(xì)胞浸潤增多(圖3)。同時(shí),分離血管組織進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序,基因表達(dá)量用FPKM衡....

圖4.ApoEKO和miR-223/ApoEDKO小鼠血管轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序數(shù)據(jù)分析炎癥相關(guān)基因表達(dá)(n=3)

圖3.ApoEKO和miR-223/ApoEDKO小鼠炎癥細(xì)胞標(biāo)志物Mac2及平滑肌標(biāo)志物SM22染色結(jié)果的比較(免疫組化)2.4miR-223可能通過靶基因IL-6調(diào)控血管炎癥及動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展

本文編號：3906690