發(fā)布時間：2024-02-07 04:27

　　背景:心血管疾病嚴重威脅人類身體健康,已位列全球致死疾病之首。動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是眾多心血管疾病共同的主要病理基礎。內(nèi)皮細胞是血管壁的重要組成部分,在調(diào)節(jié)血流、血小板激活、白細胞粘附等過程中發(fā)揮不可或缺的作用。當血管內(nèi)皮細胞受損時,血管收縮和舒張平衡被打破,內(nèi)皮功能受到影響。而內(nèi)皮細胞功能障礙是多種心血管疾病發(fā)生過程中的始動因素或促進因素。因此,早期防治內(nèi)皮功能障礙是預防和治療心血管疾病的關(guān)鍵。同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)是心血管疾病特別是動脈粥樣硬化的一個獨立、重要的危險因子。Hcy是人體內(nèi)甲硫氨酸代謝過程中產(chǎn)生的中間產(chǎn)物�？崭寡獫{中Hcy高于15μM被稱為高同型半胱氨酸血癥(Hyperhomocysteinemia,HHcy)。研究表明HHcy與血管內(nèi)皮細胞損傷相關(guān),可能與氧化應激、炎癥應答、亞硝基化水平下調(diào)等方面有關(guān),但具體機制仍不明確,因此繼續(xù)尋找治療Hcy引起心血管疾病,特別是動脈粥樣硬化的靶點至關(guān)重要。線粒體不僅是細胞合成ATP的主要場所,還參與諸如鈣穩(wěn)態(tài)平衡、信號傳導、自噬等諸多生物進程。研究發(fā)現(xiàn)在心血管疾病患者的內(nèi)皮...

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
英文摘要
論文創(chuàng)新點
縮略詞表
引言
實驗試劑與儀器
    1 細胞
    2 實驗儀器
    3 實驗試劑
    4 實驗抗體
    5 實驗溶液
        5.1 D,L-Hcy配制
        5.2 實驗相關(guān)溶液配制
實驗方法
    1 內(nèi)皮細胞貼壁培養(yǎng)
    2 MTT法檢測內(nèi)皮細胞活力
        2.1 不同濃度Hcy處理內(nèi)皮細胞24 h對細胞活力的影響
        2.2 同一濃度Hcy處理內(nèi)皮細胞不同時間對細胞活力的影響
    3 透射電鏡觀察Hcy對內(nèi)皮細胞亞細胞結(jié)構(gòu)的影響
    4 JC-1染色檢測內(nèi)皮細胞線粒體膜電位
    5 內(nèi)皮細胞總一氧化氮(NO)水平測定
    6 內(nèi)皮細胞活性氧(ROS)水平檢測
    7 內(nèi)皮細胞ATP含量檢測
    8 內(nèi)皮細胞線粒體Ca²⁺濃度檢測
    9 細胞免疫熒光檢測蛋白表達
    10 蛋白質(zhì)免疫共沉淀檢測蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用
    11 Western-blot檢測內(nèi)皮細胞蛋白水平
        11.1 細胞蛋白提取
            11.1.1 細胞總蛋白提取
            11.1.2 線粒體蛋白提取
        11.2 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western-blot)
    12 數(shù)據(jù)分析
第一部分 Hey引起內(nèi)皮細胞線粒體毒性作用研究
    1 實驗結(jié)果
        1.1 Hcy減弱內(nèi)皮細胞活力
        1.2 Hcy對內(nèi)皮細胞損傷的影響
            1.2.1 Hcy下調(diào)內(nèi)皮細胞標志蛋白表達
            1.2.2 Hcy引起內(nèi)皮細胞舒張因子和收縮因子失衡
        1.3 Hcy對內(nèi)皮細胞亞細胞結(jié)構(gòu)的影響
        1.4 Hcy引起內(nèi)皮細胞線粒體功能障礙
            1.4.1 Hcy引起內(nèi)皮細胞線粒體膜電位降低
            1.4.2 Hcy引起內(nèi)皮細胞ATP水平降低
            1.4.3 Hcy引起細胞內(nèi)ROS水平升高
    2 討論
    3 小結(jié)
第二部分 Hey致內(nèi)皮細胞線粒體功能障礙的機制研究
    1 實驗結(jié)果
        1.1 Hcy引起內(nèi)皮細胞線粒體Ca²⁺濃度升高
        1.2 Hcy致內(nèi)皮細胞線粒體Ca(2+)濃度升高可能與MAM結(jié)構(gòu)增強有關(guān)
        1.3 Hcy致線粒體Ca²⁺濃度升高是其引起內(nèi)皮細胞線粒體功能障礙的重要原因
        1.4 Hcy通過升高線粒體Ca²⁺濃度激活GSK3β影響線粒體動態(tài)平衡
        1.5 Hcy致線粒體Ca²⁺濃度升高參與其引起的內(nèi)皮細胞線粒體自噬
    2 討論
    3 小結(jié)
總結(jié)
參考文獻
綜述
    參考文獻
作者簡歷及在讀期間所獲成果



本文編號：3896759