背景:鈣化性主動脈瓣疾病(Calcific aortic valve disease,CAVD)是繼冠心病和高血壓之后的第三大心血管疾病,但臨床缺乏有效防治藥物,因此有必要開展CAVD發(fā)病機(jī)制研究以尋找早期干預(yù)方法�；钚匝�(Reactive oxygen species,ROS)參與CAVD,但ROS的來源及其對鈣化的調(diào)控作用需深入研究。NADPH氧化酶-2(NADPH oxidase-2,Nox2)是重要ROS來源,參與多種心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展,然而Nox2在CAVD中作用尚不清楚,甚至缺乏關(guān)于Nox在正常主動脈瓣膜組織細(xì)胞表達(dá)的基本了解。目的:1闡明Nox主要亞型Nox2和Nox4在豬主動脈瓣膜組織和細(xì)胞的生理性表達(dá);2檢測Nox2在離體瓣膜間質(zhì)細(xì)胞鈣化過程和在體兔CAVD瓣膜中的水平變化;3明確Nox2抑制劑雷公藤紅素對體外細(xì)胞鈣化的影響和在體兔CAVD的保護(hù)作用。方法:1分離培養(yǎng)原代豬主動脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞(Aortic valvular interstitial cells,AVIC)和內(nèi)皮細(xì)胞(Endothelial cells,EC),分別利用RT-PCR、Western ...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1β-actin、Nox2、Nox4、OPN擴(kuò)增曲線和溶解曲線

圖1.1β-actin、Nox2、Nox4、OPN擴(kuò)增曲線和溶解曲線1.2.3Westernblot1.2.3.1細(xì)胞和組織裂解液的制備1.2.3.1.1細(xì)胞裂解（1）培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)預(yù)冷的PBS漂洗2次，裂解液中加入蛋白酶和磷酸酶抑制劑；（2）吸盡PBS，加入預(yù)....

圖1.2蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線

濃度的測定：準(zhǔn)蛋白：BCA試劑按A液:B液50:1的比例配制適量B準(zhǔn)備六個1.5mlEP管，前五個加入40μlddH2O，向白溶液，混勻后取一半加入下一個EP管中，重復(fù)配，依次為2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg測樣品....

圖2.4Nox2和Nox4在主動脈瓣膜細(xì)胞的免疫熒光染色

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文圖2.3Nox2和Nox4在培養(yǎng)的EC和VIC中的表達(dá)。A：Nox2和Nox4mRNA水平，**P＜0.01vVIC，n=6/組；BandC：Nox4和Nox2蛋白水平，n=3/組。*P＜0.05。05101520mRNAleve....

圖2.5培養(yǎng)的VIC鈣化過程中Nox2的蛋白水平變化

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文白水平標(biāo)識物如骨橋蛋白（Osteopontin，OPN）及鈣化關(guān)鍵信號分子如Runx表達(dá)水平顯著高于對照組（P＜0.05）（圖2.5B），說明體外培養(yǎng)的VIC鈣型穩(wěn)定可靠。有意義的是，隨著鈣化的進(jìn)展，特別是從鈣化第7天開始，Nox含量在VIC....

本文編號：3894219