目的:應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染及RNA干擾等分子生物學(xué)手段,從Nrf2-ARE信號通路的角度探討DJ-1上調(diào)H9c2心肌樣細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶(MnSOD、CAT、GSH-Px)的表達(dá),對抗缺氧/復(fù)氧(H/R)所誘發(fā)的氧化應(yīng)激損傷的分子機(jī)制。方法:1、H9c2心肌樣細(xì)胞分別經(jīng)DJ-1 siRNA、陰性對照siRNA(NC siRNA)、pFlag-DJ-1重組載體及其相應(yīng)的對照空質(zhì)粒pFlag瞬時(shí)轉(zhuǎn)染24 h后,通過Western blot檢查DJ-1蛋白、抗氧化酶MnSOD、CAT、GPx蛋白表達(dá)的變化,以求觀察DJ-1不同表達(dá)水平對H9c2細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶MnSOD、CAT、GPx蛋白表達(dá)的影響。2、H9c2心肌樣細(xì)胞分別經(jīng)DJ-1 siRNA、NC si RNA、pFlag-DJ-1、pFlag瞬時(shí)轉(zhuǎn)染24 h后,建立H/R模型,通過檢測以下變化,探討DJ-1不同表達(dá)水平對H/R所誘發(fā)的氧化應(yīng)激損傷的影響:(1)MTT法檢測各組心肌細(xì)胞存活率的變化;(2)利用試劑盒檢測各組細(xì)胞內(nèi)LDH活性的變化;(3)應(yīng)用比色法測定MDA含量的變化;(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量的變化。3、H9c2...

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫及全稱和中文對照
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器和設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 H9c2細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.3.2 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)
        2.3.3 H9c2心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧H/R模型的構(gòu)建
        2.3.4 免疫印跡(Western Blotting)法檢測H9c2心肌細(xì)胞中蛋白表達(dá)
        2.3.5 H9c2細(xì)胞存活率和乳酸脫氫酶(LDH)活性的測定
        2.3.6 H9c2細(xì)胞內(nèi)ROS與丙二醛(MDA)的含量的測定
        2.3.7 免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation，Co-IP)
        2.3.8 染色質(zhì)免疫共沉淀法（Chromatin Immunoprecipitation，Ch IP）
        2.3.9 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測
    2.4 處理數(shù)據(jù)
第3章 結(jié)果
    3.1 DJ-1 誘導(dǎo)H9c2細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶表達(dá)，對抗H/R誘發(fā)的氧化應(yīng)激
    3.2 DJ-1 激活H9c2細(xì)胞內(nèi)Nrf2-ARE信號通路
    3.3 Nrf2-ARE信號通路介導(dǎo)DJ-1 上調(diào)抗氧化酶蛋白表達(dá)
    3.4 Nrf2-ARE信號通路的激活介導(dǎo)DJ-1 對抗H/R所誘發(fā)氧化應(yīng)激損傷
第4章 討論
第5章 結(jié)論
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3890803