目的:研究piRNA調(diào)控人的血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells of human,HA-VSMC)增殖遷移的作用和機制,可能為動脈粥樣硬化臨床靶向治療提供新的潛在靶點。方法:(1)APOE-/-小鼠高脂喂養(yǎng)12周構建動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)小鼠模型;高通量測序、實時熒光定量聚合鏈式反應(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和低脫氧核糖核苷三磷酸反轉錄法(RTLP)篩選和鑒定發(fā)揮潛在作用的候選基因小分子非編碼piRNA(PIWI-interacting RNA,piRNA);檢測目的piRNA在各組織和細胞系中表達,選定合適細胞系。(2)piRNA敲低和過表達驗證其是否調(diào)控HA-VSMC功能;CCK8、Ed U、transwell和細胞劃痕實驗檢測piRNA對HA-VSMC增殖和遷移的影響。(3)生物信息學方法預測目的piRNA下游靶標蛋白,RT-qPCR和蛋白免疫印跡驗證其表達變化。(4)合成沉默靶蛋白表達基因,驗證是否在細胞中成功表達;CCK...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
1 材料與方法
    1.1 實驗試劑與材料
    1.2 實驗儀器與設備
    1.3 溶液配置
    1.4 實驗方法
2 實驗結果
    2.1 高通量測序篩選發(fā)揮潛在功能的piRNA
    2.2 piR-16抑制HA-VSMC的增殖和遷移
    2.3 piR-16可以靶向調(diào)節(jié)hnRNPK蛋白表達
    2.4 hnRNPK可以調(diào)節(jié)HA-VSMC的增殖和遷移
    2.5 piR-16可以通過靶向hnRNPK調(diào)節(jié)HA-VSMC的增殖和遷移
    2.6 piR-16可以在通過甲基化調(diào)節(jié)hnRNPK的表達量
    2.7 piR-16可以在動物體內(nèi)抑制動脈粥樣硬化的發(fā)生
    2.8 piR-16在臨床樣本中的表達情況
3 討論與展望
結論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
縮略詞表
致謝



本文編號：3879099