目的心肌梗死嚴(yán)重威脅著人們的生命與健康,給家庭和社會帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。迄今為止,對于心肌梗死的治療尚無理想措施。干細(xì)胞移植是目前最有前景的治療手段,但仍存在移植后細(xì)胞存活率低、難以向心肌細(xì)胞分化等關(guān)鍵性問題,這嚴(yán)重地影響了干細(xì)胞移植治療的效果。因此,制定有效地干細(xì)胞移植治療措施是亟待解決的首要問題。本研究利用承載MSCs或Tβ4過表達(dá)MSCs (Tβ4-MSCs)的納米纖維補(bǔ)片移植治療心肌梗死,探討PG納米纖維補(bǔ)片和Tβ4過表達(dá)對外源性和內(nèi)源性心肌修復(fù)的促進(jìn)作用及其機(jī)制,以期為干細(xì)胞移植治療的深入開展和臨床應(yīng)用提供新思路和可行性實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采用高分子材料PCL和天然生物材料明膠靜電紡絲制備PG納米纖維,利用體外三維培養(yǎng)系統(tǒng)評價PG納米纖維與細(xì)胞的相容性。通過建立體外低氧模型模擬體內(nèi)缺血缺氧微環(huán)境,評價低氧和營養(yǎng)剝奪條件下PG對MSCs存活及增殖活性的影響。建立雌性大鼠心肌梗死模型,于梗死后1周移植承載表達(dá)GFP的雄性大鼠MSCs的PG納米纖維補(bǔ)片。移植后4周通過超聲心動圖檢測大鼠心功能變化。用HE和Masson三色染色觀察大鼠左心室壁的形態(tài)和組織學(xué)變化,測量左心室壁厚度。采用CD...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 PG納米纖維制備及其體外實(shí)驗(yàn)研究
    引言
    1 儀器和試劑
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 MSCs的分離和培養(yǎng)
        2.2 PG納米纖維制備及其特性研究
        2.3 PG對細(xì)胞生物學(xué)特性的影響
        2.4 PG對細(xì)胞存活和增殖活性的影響
        2.5 PG對低氧條件下細(xì)胞存活及增殖活性的影響
        2.6 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 PG的表面形態(tài)特征
        3.2 PG在細(xì)胞生物學(xué)特性方面的作用
        3.3 PG對細(xì)胞存活和增殖活性的促進(jìn)作用
        3.4 PG對低氧條件下細(xì)胞存活和增殖活性的保護(hù)作用
    4 討論
第二部分 PG納米纖維承載MSCs移植治療大鼠心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究
    引言
    1 儀器和試劑
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 納米纖維干細(xì)胞片制備
        2.2 大鼠心肌梗死模型建立與納米纖維干細(xì)胞片移植
        2.3 心功能檢測
        2.4 組織學(xué)檢測
        2.5 免疫組織化學(xué)染色
        2.6 移植細(xì)胞存活和分化檢測
        2.7 內(nèi)源性干/祖細(xì)胞激活和動員的檢測
        2.8 PCR檢測
        2.9 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 最佳MOI的確定和轉(zhuǎn)染效率
        3.2 納米纖維干細(xì)胞片移植對心功能改善的作用
        3.3 納米纖維干細(xì)胞片移植后左心室壁結(jié)構(gòu)變化
        3.4 納米纖維干細(xì)胞片促進(jìn)梗死組織的血管新生
        3.5 納米纖維干細(xì)胞片移植后的淋巴管新生變化
        3.6 納米纖維干細(xì)胞片促進(jìn)梗死組織的心肌再生
        3.7 納米纖維干細(xì)胞片在外源性心肌修復(fù)中的作用
        3.8 納米纖維干細(xì)胞片在內(nèi)源性心肌修復(fù)中的作用
    4 討論
第三部分 PG承載Tβ4過表達(dá)MSCs移植對內(nèi)源性心肌修復(fù)的促進(jìn)作用
    引言
    1 儀器和試劑
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 Tβ4基因重組慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染MSCs
        2.3 Tβ4基因表達(dá)檢測
        2.4 Tβ4蛋白表達(dá)檢測
        2.5 納米纖維干細(xì)胞片制備
        2.6 納米纖維干細(xì)胞片移植
        2.7 心功能檢測
        2.8 組織學(xué)檢測
        2.9 免疫組織化學(xué)染色
        2.10 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 重組質(zhì)粒GV205的鑒定
        3.2 慢病毒滴度測定結(jié)果
        3.3 轉(zhuǎn)染重組慢病毒載體后MSCs的Tβ4 mRNA表達(dá)水平
        3.4 轉(zhuǎn)染重組慢病毒載體后MSCs的Tβ4蛋白表達(dá)水平
        3.5 Tβ4過表達(dá)對心功能改善的促進(jìn)作用
        3.6 Tβ4過表達(dá)對左心室壁組織結(jié)構(gòu)變化的影響
        3.7 Tβ4過表達(dá)對移植細(xì)胞存活和分化的作用
        3.8 Tβ4過表達(dá)對內(nèi)源性心肌修復(fù)的促進(jìn)作用及其機(jī)制
    4 討論
全文小結(jié)
課題創(chuàng)新性
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
附錄



本文編號：3874211