目的:探討27nt-miRNA(27nt-miR)對氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)凋亡的影響及分子機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)HUVECs,分為正常對照組、Ox-LDL組、27nt-miR+Ox-LDL組、anti-27nt-miR+Ox-LDL組和陰性對照+Ox-LDL組。正常對照組給予正常培養(yǎng);Ox-LDL組用40 mg/L Ox-LDL作用48 h誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;27nt-miR+Ox-LDL組、anti-27nt-miR+Ox-LDL組及陰性對照+Ox-LDL組分別以相同的操作方法轉(zhuǎn)染相應(yīng)慢病毒質(zhì)粒后用40 mg/L Ox-LDL作用48 h誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。采用CCK-8法檢測細(xì)胞活力,劃痕實驗檢測細(xì)胞的遷移能力,caspase-3活性試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)caspase-3活性,RT-qPCR法和Western blot法檢測細(xì)胞內(nèi)Bcl-2、Bax和caspase-3 mRNA及蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:與陰性對照+Ox-LDL組相比,27nt-miR+Ox-LDL組HUVECs的27ntmiR高表達(dá)可顯著降低細(xì)胞活力和遷移能力(P<0.05),顯著...

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【文章目錄】：
材料和方法
    1主要試劑和儀器
    2方法
        2.127nt-miR慢病毒載體的構(gòu)建和鑒定
        2.2HUVECs慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和實驗分組
        2.3CCK-8法檢測HUVECs活力
        2.4劃痕法檢測HUVECs的遷移能力
        2.5caspase-3活性試劑盒檢測caspase-3活性
        2.6Hoechst 33258染色法檢測HUVECs的凋亡情況
        2.7流式細(xì)胞術(shù)檢測各組HUVECs的凋亡率
        2.8RT-qPCR法檢測HUVECs中Bcl-2、Bax和cas--的表達(dá)情況
        2.9Western blot法檢測HUVECs中Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表達(dá)情況
        3統(tǒng)計學(xué)處理
結(jié)果
    1 27nt-miR對Ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs活力的影響
    2 27nt-miR對Ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs遷移能力的影響
    3 27nt-miR對Ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中caspase-3活性的影響
    4 27nt-miR對Ox-LDL誘導(dǎo)HUVECs凋亡的影響
    5 27nt-miR對Ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs凋亡率的影響
    6 27nt-miR對Bax、caspase-3和Bcl-2 mRNA表達(dá)的影響
    7 27nt-miR對Bax、caspase-3和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響
討論



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