發(fā)布時(shí)間：2017-05-20 15:14

  本文關(guān)鍵詞：TLR4通過(guò)PPARγ下調(diào)ABCG1表達(dá)促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)炎癥反應(yīng)及脂質(zhì)沉積，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的:動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是慢性炎癥過(guò)程,由膽固醇及脂蛋白在血管壁的聚集而誘發(fā)。血液循環(huán)中多種細(xì)胞因子及血管壁多種細(xì)胞類型參與了AS的形成,包括內(nèi)皮細(xì)胞,淋巴細(xì)胞,單核細(xì)胞以及平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cell,SMC)。SMC在AS病變過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。SMC是血管壁上細(xì)胞外基質(zhì)的主要產(chǎn)生者,并根據(jù)致動(dòng)脈粥樣硬化的刺激改變其基質(zhì)蛋白的性質(zhì)。平滑肌細(xì)胞可向其他細(xì)胞功能轉(zhuǎn)化,如巨噬細(xì)胞,SMC可表達(dá)多種脂質(zhì)攝取受體從而形成泡沫樣細(xì)胞。如內(nèi)皮細(xì)胞,SMC可表達(dá)多種粘附分子粘附并遷移進(jìn)入血管壁。果蠅樣受體4(Toll like receptor 4,TLR4)在動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中起到重要作用,廣泛分布于巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等。Ox LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)涉及許多機(jī)制,最近的研究發(fā)現(xiàn)TLR4高度表達(dá)于富含脂質(zhì)的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊,而在TLR4基因缺陷的小鼠中動(dòng)脈粥樣硬化的病變明顯減少。過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ),其主要功能是細(xì)胞分化與脂質(zhì)代謝的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子,屬于核受體超家族成員。三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1(ABCG1)在膽固醇外流中發(fā)揮著重要作用,同時(shí)通過(guò)調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇平衡,ABCG1可能在抗凋亡和抗炎癥中發(fā)揮著重要作用。在巨噬細(xì)胞中PPARγ激動(dòng)劑可調(diào)節(jié)ABCG1的表達(dá)。由此,我們推測(cè)TLR4在VSMCs炎癥反應(yīng)和脂質(zhì)沉積中發(fā)揮著重要作用,其中的分子機(jī)制可能是TLR4通過(guò)PPARγ下調(diào)ABCG1的表達(dá)。方法:1.瓊脂糖凝膠電泳鑒定實(shí)驗(yàn)小鼠基因型;2.組織貼塊法培養(yǎng)原代VSMCs;3.免疫熒光染色鑒定原代VSMCs、觀察TLR4/PPARγ、TLR4/ABCG1共定位于細(xì)胞內(nèi);4.real-time PCR檢測(cè)VSMCs內(nèi)TNF-α、IL-6、MCP-1、VCAM1mRNA表達(dá);5.Western blot檢測(cè)VSMCs內(nèi)TLR4、PPARγ、ABCG1蛋白表達(dá)水平;6.Bodipy染色檢測(cè)VSMCs內(nèi)脂質(zhì)沉積,酶促比色的方法定量測(cè)定VSMCs內(nèi)總膽固醇含量;7.羅格列酮激活WT-VSMCs內(nèi)PPARγ信號(hào)通路;8.PPARγ-si RNA轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-VSMCs,使細(xì)胞內(nèi)PPARγ基因沉默。結(jié)果:1.鑒定了小鼠基因型,體外培養(yǎng)及鑒定了原代VSMCs;2.免疫熒光染色鑒定TLR4/PPARγ、TLR4/ABCG1共表達(dá)于WT-VSMCs中。3.ox LDL刺激WT-VSMCs后,TLR4通路活化,TLR4表達(dá)增高,促進(jìn)了炎癥因子TNF-α、IL-6、MCP-1、VCAM1的分泌;TLR4基因敲除后上述炎癥因子分泌受抑制。4.ox LDL刺激TLR4活化后,VSMCs內(nèi)脂質(zhì)沉積明顯增加;TLR4基因敲除后,VSMCs內(nèi)脂質(zhì)沉積減少。5.TLR4激活后的PPARγ、ABCG1表達(dá)下調(diào),TLR4基因敲除后PPARγ、ABCG1表達(dá)升高。6.在ox LDL刺激培養(yǎng)的WT-VSMCs中羅格列酮使ABCG1表達(dá)升高,炎癥反應(yīng)減輕,脂質(zhì)沉積明顯減少;7:在ox LDL刺激培養(yǎng)的WT-VSMCs中PPARγ基因沉默后ABCG1表達(dá)受到抑制,炎癥反應(yīng)加重,脂質(zhì)沉積于細(xì)胞內(nèi)增多。結(jié)論:TLR4通過(guò)PPARγ下調(diào)ABCG1的表達(dá),促進(jìn)VSMCs內(nèi)炎癥反應(yīng)和脂質(zhì)沉積。
【關(guān)鍵詞】：血管平滑肌細(xì)胞 炎癥反應(yīng) Toll樣受體4 ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1 過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ 脂質(zhì)沉積
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R543.5
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 TLR4介導(dǎo)ABCG1表達(dá)的調(diào)節(jié)及VSMCs內(nèi)炎癥反應(yīng)及脂質(zhì)沉積13-40
• 2.1 材料與方法14-29
• 2.2 結(jié)果29-37
• 2.3 討論37-39
• 2.4 小結(jié)39-40
• 第三章 PPARγ 在TLR4介導(dǎo)的ABCG1表達(dá)下調(diào)及VSMCs內(nèi)炎癥反應(yīng)及脂質(zhì)沉積中的作用40-51
• 3.1 材料與方法40-44
• 3.2 結(jié)果44-49
• 3.3 討論49-50
• 3.4 小結(jié)50-51
• 全文結(jié)論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 文獻(xiàn)綜述 TLR4參與平滑肌細(xì)胞泡沫化過(guò)程的相關(guān)性研究56-64
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 碩士期間發(fā)表論文64-65
• 致謝65

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本文編號(hào)：382008