本文關(guān)鍵詞：TLR4通過PPARγ下調(diào)ABCG1表達促進血管平滑肌細胞內(nèi)炎癥反應及脂質(zhì)沉積，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的:動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是慢性炎癥過程,由膽固醇及脂蛋白在血管壁的聚集而誘發(fā)。血液循環(huán)中多種細胞因子及血管壁多種細胞類型參與了AS的形成,包括內(nèi)皮細胞,淋巴細胞,單核細胞以及平滑肌細胞(smooth muscle cell,SMC)。SMC在AS病變過程中發(fā)揮著重要作用。SMC是血管壁上細胞外基質(zhì)的主要產(chǎn)生者,并根據(jù)致動脈粥樣硬化的刺激改變其基質(zhì)蛋白的性質(zhì)。平滑肌細胞可向其他細胞功能轉(zhuǎn)化,如巨噬細胞,SMC可表達多種脂質(zhì)攝取受體從而形成泡沫樣細胞。如內(nèi)皮細胞,SMC可表達多種粘附分子粘附并遷移進入血管壁。果蠅樣受體4(Toll like receptor 4,TLR4)在動脈粥樣硬化過程中起到重要作用,廣泛分布于巨噬細胞、內(nèi)皮細胞、血管平滑肌細胞、脂肪細胞等。Ox LDL誘導的炎癥反應涉及許多機制,最近的研究發(fā)現(xiàn)TLR4高度表達于富含脂質(zhì)的動脈粥樣硬化斑塊,而在TLR4基因缺陷的小鼠中動脈粥樣硬化的病變明顯減少。過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ),其主要功能是細胞分化與脂質(zhì)代謝的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子,屬于核受體超家族成員。三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體G1(ABCG1)在膽固醇外流中發(fā)揮著重要作用,同時通過調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇平衡,ABCG1可能在抗凋亡和抗炎癥中發(fā)揮著重要作用。在巨噬細胞中PPARγ激動劑可調(diào)節(jié)ABCG1的表達。由此,我們推測TLR4在VSMCs炎癥反應和脂質(zhì)沉積中發(fā)揮著重要作用,其中的分子機制可能是TLR4通過PPARγ下調(diào)ABCG1的表達。方法:1.瓊脂糖凝膠電泳鑒定實驗小鼠基因型;2.組織貼塊法培養(yǎng)原代VSMCs;3.免疫熒光染色鑒定原代VSMCs、觀察TLR4/PPARγ、TLR4/ABCG1共定位于細胞內(nèi);4.real-time PCR檢測VSMCs內(nèi)TNF-α、IL-6、MCP-1、VCAM1mRNA表達;5.Western blot檢測VSMCs內(nèi)TLR4、PPARγ、ABCG1蛋白表達水平;6.Bodipy染色檢測VSMCs內(nèi)脂質(zhì)沉積,酶促比色的方法定量測定VSMCs內(nèi)總膽固醇含量;7.羅格列酮激活WT-VSMCs內(nèi)PPARγ信號通路;8.PPARγ-si RNA轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-VSMCs,使細胞內(nèi)PPARγ基因沉默。結(jié)果:1.鑒定了小鼠基因型,體外培養(yǎng)及鑒定了原代VSMCs;2.免疫熒光染色鑒定TLR4/PPARγ、TLR4/ABCG1共表達于WT-VSMCs中。3.ox LDL刺激WT-VSMCs后,TLR4通路活化,TLR4表達增高,促進了炎癥因子TNF-α、IL-6、MCP-1、VCAM1的分泌;TLR4基因敲除后上述炎癥因子分泌受抑制。4.ox LDL刺激TLR4活化后,VSMCs內(nèi)脂質(zhì)沉積明顯增加;TLR4基因敲除后,VSMCs內(nèi)脂質(zhì)沉積減少。5.TLR4激活后的PPARγ、ABCG1表達下調(diào),TLR4基因敲除后PPARγ、ABCG1表達升高。6.在ox LDL刺激培養(yǎng)的WT-VSMCs中羅格列酮使ABCG1表達升高,炎癥反應減輕,脂質(zhì)沉積明顯減少;7:在ox LDL刺激培養(yǎng)的WT-VSMCs中PPARγ基因沉默后ABCG1表達受到抑制,炎癥反應加重,脂質(zhì)沉積于細胞內(nèi)增多。結(jié)論:TLR4通過PPARγ下調(diào)ABCG1的表達,促進VSMCs內(nèi)炎癥反應和脂質(zhì)沉積。
【關(guān)鍵詞】：血管平滑肌細胞 炎癥反應 Toll樣受體4 ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體G1 過氧化物酶體增殖物激活受體-γ 脂質(zhì)沉積
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 TLR4介導ABCG1表達的調(diào)節(jié)及VSMCs內(nèi)炎癥反應及脂質(zhì)沉積13-40
• 2.1 材料與方法14-29
• 2.2 結(jié)果29-37
• 2.3 討論37-39
• 2.4 小結(jié)39-40
• 第三章 PPARγ 在TLR4介導的ABCG1表達下調(diào)及VSMCs內(nèi)炎癥反應及脂質(zhì)沉積中的作用40-51
• 3.1 材料與方法40-44
• 3.2 結(jié)果44-49
• 3.3 討論49-50
• 3.4 小結(jié)50-51
• 全文結(jié)論51-53
• 參考文獻53-56
• 文獻綜述 TLR4參與平滑肌細胞泡沫化過程的相關(guān)性研究56-64
• 參考文獻60-64
• 碩士期間發(fā)表論文64-65
• 致謝65

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本文編號：382008