[目的]動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ),尿毒癥毒素硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)是AS的重要危險因素,其發(fā)生機制仍未完全闡明。miR-34a-5p通路可多靶點作用于AS相關(guān)信號通路和分子。我們推測miR-34a-5p通路可能與IS促AS發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。為驗證上述假設(shè),我們擬采用分子生物學實驗技術(shù),對miR-34a-5p通路在IS促AS中的作用進行研究。[方法]1.運用MTT比色法檢測IS對HUVECs、HA-VSMCs細胞活力的影響,篩選IS作用濃度和時間;2.IS干預HUVECs、HA-VSMCs,運用RT-qPCR檢測細胞miR-34a-5p表達情況;3.先用miR-34a-5p抑制劑(inhibitors)和模擬物(mimics)質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染HUVECs、HA-VSMCs,以獲得低表達和高表達miR-34a-5p的細胞,轉(zhuǎn)染24小時后用IS處理細胞,IS濃度1000μM、干預36小時,運用CCK-8法和EdU法檢測細胞增殖情況,劃痕實驗和Transwell實驗檢測細胞遷移情況,流式細胞術(shù)和Hoechst 33...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        1.2.1 尿毒癥毒素IS參與了致AS進程
        1.2.2 microRNA是促進AS發(fā)生發(fā)展的重要調(diào)控因素,其機制尚未闡明
        1.2.3 miR-34a通路與AS病理生理過程密切相關(guān)
    1.3 本課題的創(chuàng)新之處
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 主要試劑與抗體
        2.1.3 主要儀器與耗材
    2.2 方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 硫酸吲哚酚溶液的配制
        2.2.3 MTT比色法
        2.2.4 細胞中總RNA提取
        2.2.5 miRNA cDNA第一鏈合成
        2.2.6 實時定量PCR(RT-qPCR)
        2.2.7 miRNA模擬物和抑制劑瞬時轉(zhuǎn)染
        2.2.8 細胞增殖實驗
        2.2.9 細胞遷移實驗
        2.2.10 細胞凋亡實驗
        2.2.11 貼壁細胞總蛋白提取
        2.2.12 BCA法蛋白定量
        2.2.13 Western blot
        2.2.14 統(tǒng)計學方法
第3章 結(jié)果
    3.1 IS對HUVECs、VSMCs細胞活力的影響
    3.2 IS干預HUVECs、VSMCs對miR-34a-5p表達的影響
    3.3 IS、miR-34a-5p對HUVECs和VSMCs增殖的影響
    3.4 IS、miR-34a-5p對HUVECs和VSMCs遷移的影響
    3.5 IS、miR-34a-5p對HUVECs和VSMCs凋亡的影響
    3.6 miR-34a-5p通路相關(guān)蛋白水平的表達情況
第4章 討論
    4.1 AS是CKD的重要致死性因素
    4.2 IS促進AS發(fā)生發(fā)展
    4.3 miR-34a對AS的促進因素
    4.4 IS通過上調(diào)miR-34a發(fā)揮促AS的作用
    4.5 miR-34a在HUVECs和VSMCs中上調(diào)p53和下調(diào)Notch1表達可能是IS致AS的機制
第5章 結(jié)論
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
攻讀學位期間的科研成果
致謝



本文編號：3812676