目的:研究7-二氟甲氧基-5,4’-二甲氧基金雀異黃素(7-difluorome-thoxy-5,4’-dimethoxygenistein,DFMG)對(duì) LPC 處理人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVE-12)內(nèi)皮小管形成和調(diào)節(jié)Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)信號(hào)通路對(duì)內(nèi)皮小管形成的影響。方法:1、用不同濃度(0、10、20、30、40 μM)的溶血性磷脂酰膽堿(Lysophosphatidylcholine,LPC)對(duì) HUVE-12 進(jìn)行處理,通過(guò) CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性,乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒測(cè)上清中LDH的含量,劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LPC對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞遷移的影響,Western blotting檢測(cè)TLR4、VEGF蛋白表達(dá),以得到最適的LPC處理濃度。用最適濃度的LPC處理HUVE-12制備氧化損傷細(xì)胞模型。2、用30 μM LPC對(duì)HUVE-12進(jìn)行造模。分別用不同劑量的DFMG(0.3、3.0μM)預(yù)孵育 HUVE-12 30min 后,再用 LPC 處理,通過(guò)CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性,LDH試劑盒測(cè)上清中LDH的含量,qPCR檢測(cè)TLR4...

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一部分 LPC誘導(dǎo)的HUVE-12損傷模型的制備
    1.1 材料與試劑
        1.1.1 細(xì)胞系
        1.1.2 試劑與耗材
        1.1.3 主要試劑的配制
        1.1.4 儀器設(shè)備
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 HUVE-12培養(yǎng)
        1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        1.2.3 CCK-8試劑盒檢測(cè)LPC對(duì)HUVE-12增殖的影響
        1.2.4 LDH試劑盒測(cè)LPC損傷HUVE-12上清中LDH含量
        1.2.5 劃痕實(shí)驗(yàn)測(cè)LPC對(duì)HUVE-12遷移的影響
        1.2.6 Western Blot檢測(cè) LPC對(duì)HUVE-12 TLR4，VEGF蛋白的影響
        1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 LPC抑制HUVE-12增殖
        1.3.2 LPC促進(jìn)HUVE-12 LDH分泌
        1.3.3 LPC促進(jìn)HUVE-12遷移
        1.3.4 LPC上調(diào)HUVE-12 TLR4、VEGF蛋白表達(dá)
    1.4 討論
    1.5 小結(jié)
第二部分 DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12內(nèi)皮小管形成的影響
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 藥品與試劑
        2.1.3 主要試劑的配制
        2.1.4 儀器與設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.3 條件培養(yǎng)基的配制
        2.2.4 CCK-8試劑盒測(cè)DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12增殖的影響
        2.2.5 LDH試劑盒測(cè)DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12 LDH的影響
        2.2.6 劃痕法檢測(cè)DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12遷移的影響
        2.2.7 Matrigel基質(zhì)膠血管形成試驗(yàn)檢測(cè)DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12內(nèi)皮小管形成的影響
        2.2.8 qPCR測(cè)DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12 TLR4、VEGF mRNA的影響
        2.2.9 Western Blot檢測(cè)DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12 TLR4、VEGF蛋白的影響
        2.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12增殖的影響
        2.3.2 DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12 LDH分泌的影響
        2.3.3 DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12遷移的影響
        2.3.4 DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12內(nèi)皮小管形成的影響
        2.3.5 DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12 TLR4、VEGF mRNA的影響
        2.3.6 DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12 TLR4、VEGF蛋白的影響
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三部分 DFMG干預(yù)TLR4信號(hào)通路對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12內(nèi)皮小管形成的影響
    3.1 材料與試劑
        3.1.1 藥品與試劑
        3.1.2 病毒載體
        3.1.3 引物
        3.1.4 主要試劑的配制
        3.1.5 儀器與設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 TLR4慢病毒感染HUVE-12及穩(wěn)定細(xì)胞系的篩選
        3.2.3 qPCR檢測(cè)穩(wěn)定細(xì)胞系中TLR4的表達(dá)
        3.2.4 qPCR檢測(cè)DFMG干預(yù)TLR4信號(hào)通路對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12VEGF mRNA的影響
        3.2.5 Matrigel基質(zhì)膠內(nèi)皮小管形成試驗(yàn)檢測(cè)DFMG干預(yù)TLR4信號(hào)通路對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12 VEGF內(nèi)皮小管形成的影響
        3.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 篩選穩(wěn)定TLR4過(guò)表達(dá)及TLR4抑制表達(dá)的HUVE-12系
        3.3.2 qPCR檢測(cè)穩(wěn)定感染細(xì)胞系中TLR4表達(dá)
        3.3.3 DFMG干預(yù)TLR4信號(hào)通路對(duì)LPC誘導(dǎo)的HUVE-12血管形成的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
英文縮寫略詞索引
攻讀碩士學(xué)位期間的主要成果
致謝



本文編號(hào)：3788602