背景和目的:心肌梗死后心臟損傷的發(fā)病機(jī)制與線粒體結(jié)構(gòu)功能損害相關(guān),然而心肌梗死后線粒體損傷的上游調(diào)節(jié)機(jī)制尚未明確。在慢性疾病中Sirt3保護(hù)線粒體結(jié)構(gòu)功能。因此我們研究的目的是探討Sirt3在心肌梗死后心臟損傷中對線粒體結(jié)構(gòu)功能作用及其作用機(jī)制。方法:選取野生型和Sirt3轉(zhuǎn)基因小鼠為實(shí)驗(yàn)對象,建立心肌梗死后心臟損傷的在體模型,使用Western blot、TUNEL染色、ELISA、馬松染色、qPCR、超聲心動(dòng)圖、心肌細(xì)胞功能檢測、免疫熒光法、細(xì)胞流式技術(shù)和JC-1染色等方法,評(píng)價(jià)模型心肌梗死后心臟損傷程度、線粒體結(jié)構(gòu)和功能受損程度以及相關(guān)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)。使用“功能缺失和獲得”的方法驗(yàn)證線粒體分裂和AMPK信號(hào)通路在Sirt3減輕心肌梗死后心臟損傷中的作用。結(jié)果:Sirt3在梗死后心臟損傷的進(jìn)展中下調(diào)。Sirt3的過度表達(dá)可減輕心肌纖維化,維持心肌功能,抑制炎癥反應(yīng),減少心肌細(xì)胞死亡。線粒體結(jié)構(gòu)功能性研究表明,心肌梗死后心臟損傷的進(jìn)程中線粒體分裂增多,引起心肌細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激、代謝紊亂、線粒體電位降低和caspase9凋亡。然而,Sirt3的過度表達(dá)減弱了線粒體的分裂,從而維持...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
摘要
Abstract
前言
第一部分 Sirt3對心肌梗死后心臟損傷表型的影響
    1 研究背景
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組
        2.2 心肌梗死后心臟損傷在體模型建立
        2.3 心肌細(xì)胞分離和培養(yǎng)
        2.4 心肌梗死后心臟損傷體外模型建立和分組
        2.5 在體模型心臟功能檢測
        2.6 心臟標(biāo)本制作和組織學(xué)分析
        2.7 心肌細(xì)胞功能檢測
        2.8 細(xì)胞凋亡檢測
        2.9 比色法
        2.10 蛋白質(zhì)印跡分析
        2.11 免疫熒光共聚焦顯微鏡觀察
        2.12 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
        2.13 RNA分離和定量PCR
        2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 研究結(jié)果
        3.1 心肌梗死后Sirt3表達(dá)顯著降低
        3.2 Sirt3過表達(dá)可減少梗死后心肌細(xì)胞死亡數(shù)量
        3.3 Sirt3過表達(dá)減輕梗死后心臟纖維化
        3.4 Sirt3過表達(dá)阻止梗死后心功能下降
        3.5 Sirt3過表達(dá)減輕梗死后心臟的炎癥反應(yīng)
    4 第一部分小結(jié)
第二部分 Sirt3對心肌梗死后線粒體結(jié)構(gòu)和功能的調(diào)節(jié)作用
    1 研究背景
    2 材料與方法
        2.1 心肌梗死后心臟損傷模型建立、標(biāo)本制作和分組
        2.2 線粒體活性氧測定
        2.3 線粒體膜電位檢測
        2.4 蛋白質(zhì)印跡分析
        2.5 免疫熒光共聚焦顯微鏡觀察
        2.6 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
        2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 Sirt3抑制梗死后心臟線粒體分裂
        3.2 Sirt3通過抑制線粒體分裂來維持線粒體功能
        3.3 Sirt3通過抑制線粒體分裂阻止線粒體凋亡
    4 第二部分小結(jié)
第三部分 Sirt3抑制線粒體分裂調(diào)節(jié)機(jī)制
    1 研究背景
    2 材料與方法
        2.1 心肌梗死后心臟損傷模型建立、標(biāo)本制作和分組
        2.2 細(xì)胞凋亡檢測
        2.3 蛋白質(zhì)印跡分析
        2.4 免疫熒光共聚焦顯微鏡觀察
        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 Sirt3通過正向調(diào)節(jié)AMPK表達(dá)抑制Drp1磷酸化
        3.2 Sirt3通過調(diào)節(jié)AMPK-Drp1通路抑制線粒體分裂
        3.3 Sirt3通過調(diào)節(jié)AMPK-Drp1通路抑制心肌細(xì)胞凋亡
    4 第三部分小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝



本文編號(hào)：3779629