目的1.觀察ZnCl₂是否通過誘導(dǎo)自噬/線粒體自噬來減輕心肌細胞缺氧/復(fù)氧引起的活性氧(ROS)產(chǎn)生并保護心肌細胞。2.探討ZnCl₂誘導(dǎo)自噬/線粒體自噬的分子機制。方法建立心肌細胞H9c2缺氧/復(fù)氧模型。用透射電鏡觀察線粒體的結(jié)構(gòu)和功能改變、線粒體自噬泡的形成情況;Western blotting法檢測LC3、TOM20、TIM23、COX4、Beclin1、PINK1蛋白表達及ERK、m TOR、AMPK、Bcl-2磷酸化水平;q PCR檢測NIX和PINK1 m RNA水平的改變;用免疫熒光法檢測GFP-LC3自噬體和TOM20的共定位、Mitotrack Green(MTG)和PINK1的共定位;用線粒體熒光探針JC-1、ROS熒光探針DCFH-DA、線粒體ROS熒光探針Mitosox Red在共聚焦顯微鏡上分別測定線粒體膜電位(Mitochondrial membrane potential,△Ψm)、細胞內(nèi)總ROS和線粒體ROS水平。結(jié)果1.共聚焦顯微鏡實驗結(jié)果顯示。與正常對照組相比,復(fù)氧時細胞和線粒體內(nèi)的ROS明顯增加。用ZnC...

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：博士

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中文摘要
Abstract
縮略語
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    目的和方法
一、觀察鋅離子是否通過誘導(dǎo)自噬/線粒體自噬而減少復(fù)氧時線粒體ROS的產(chǎn)生
    1.1 材料和方法
        1.1.1 研究對象
        1.1.2 試驗儀器
        1.1.3 常用試劑
        1.1.4 關(guān)鍵試劑
        1.1.5 熒光試劑
        1.1.6 試劑盒
        1.1.7 抗體
        1.1.8 常用試劑配方
        1.1.9 H9c2細胞的復(fù)蘇、傳代和凍存
        1.1.10 建立H9c2細胞缺氧/復(fù)氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）模型
        1.1.11 BCA蛋白定量
        1.1.12 細胞計數(shù)
        1.1.13 JC-1 染色檢測細胞線粒體膜電位（Mitochondrial membrane potential，△Ψm）變化
        1.1.14 DCFH-DA檢測總ROS相對含量
        1.1.15 Mitosox Red熒光探針檢測線粒體內(nèi)ROS水平
        1.1.16 透射電子顯微鏡（Transmission election microscopy，TEM）技術(shù)
        1.1.17 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        1.1.18 細胞免疫熒光
        1.1.19 Western blotting
        1.1.20 PCR
        1.1.21 CCK8檢測細胞活性
        1.1.22 統(tǒng)計學(xué)分析
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 鋅降低缺氧/復(fù)氧時線粒體ROS的產(chǎn)生
        1.2.2 鋅誘導(dǎo)自噬
        1.2.3 鋅誘導(dǎo)線粒體自噬
        1.2.4 復(fù)氧時鋅誘導(dǎo)線粒自噬
        1.2.5 鋅通過誘導(dǎo)自噬/線粒體自噬減少缺氧/復(fù)氧時線粒體ROS的產(chǎn)生
        1.2.6 鋅離子通過誘導(dǎo)自噬/線粒體自噬而引起H9c2抗H/R損傷的保護作用
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、探討鋅誘導(dǎo)自噬/線粒體自噬的機制
    2.1 結(jié)果
        2.1.1 鋅誘導(dǎo)自噬的分子機制
        2.1.2 鋅誘導(dǎo)線粒體自噬的機制
        2.1.3 鋅防止線粒體ROS產(chǎn)生的機制
        2.1.4 缺氧/復(fù)氧過程中鋅通過誘導(dǎo)線粒體自噬而清除損傷的線粒體，減少mPTP的開放
    2.2 討論
    2.3 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
附錄
綜述 自噬/線粒體自噬的分子機制及其在心肌缺血/再灌注損傷中的作用
    綜述參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3742978