本文關(guān)鍵詞：TRPV1調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞增殖的作用及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的:慢性高血壓過程可引起血管中膜及內(nèi)膜增厚,血管壁腔比值增加,并最終導(dǎo)致肥厚性內(nèi)向性血管重構(gòu)(vascular remodeling,VR)。關(guān)于血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的研究眾多,其異常增殖是血管重構(gòu)的重要病理機(jī)制之一。正常情況下的VSMCs位于動(dòng)脈中層,表達(dá)多種收縮蛋白以發(fā)揮其收縮功能,并不具備增殖和遷移的能力。但在持續(xù)性高血壓等因素刺激下,VSMCs可發(fā)生活化,進(jìn)而獲得增殖和遷移能力,分泌多種細(xì)胞外基質(zhì),啟動(dòng)了血管重構(gòu)過程。重構(gòu)的血管反過來促進(jìn)高血壓的發(fā)展,進(jìn)而影響心、腦、腎等重要靶器官的血供導(dǎo)致靶器官損害。因此,有效抑制VSMCs異常增殖對于防治高血壓動(dòng)脈重構(gòu)及靶器官損害具有重要意義。近年來,瞬時(shí)受體電位香草醛亞家族1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)在高血壓發(fā)生、發(fā)展中的作用逐漸受到重視。TRPV1為瞬時(shí)受體電位(transient receptor potential,TRP)家族中V亞家族中的一個(gè)成員,在脂肪細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、VSMCs、心肌成纖維細(xì)胞等中均有表達(dá),能被辣椒素強(qiáng)效激活。長期食用辣椒素激活TRPV1后可以改善阻力血管的內(nèi)皮舒張功能,降低自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)的血壓。研究發(fā)現(xiàn),辣椒素激活TRPV1后可以抑制血管緊張素II誘導(dǎo)的小鼠心肌成纖維細(xì)胞的增殖,說明TRPV1對細(xì)胞增殖具有抑制作用。目前,TRPV1對于VSMCs的增殖,特別是高血壓狀態(tài)下的VSMCs增殖的作用尚不清楚。由此,本課題著重探索TRPV1激活是否可以抑制SHR胸主動(dòng)脈VSMCs的增殖進(jìn)而調(diào)控高血壓狀態(tài)下的血管重構(gòu)。PI3K/Akt信號(hào)通路參與了細(xì)胞增殖、生長等的調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn),大麻二酚可以激活結(jié)腸癌細(xì)胞中TRPV1受體,從而抑制由氧化偶氮甲烷誘導(dǎo)的Akt磷酸化過程。因此,我們進(jìn)一步推測,TRPV1激活可能通過抑制PI3K/Akt信號(hào)通路抑制高血壓狀態(tài)下VSMCs的增殖,從而改善高血壓的血管重構(gòu)。為了證實(shí)以上假設(shè),我們的研究分為3部分。第一部分原代培養(yǎng)SHR和Wistar Kyoto大鼠(WKY)來源的VSMC s并進(jìn)行鑒定。第二部分觀察TRPV1激活對VSMCs增殖的影響。第三部分初步探討TRPV1激活對VSMCs增殖影響的可能機(jī)制。方法:1.培養(yǎng)SHR和WK Y原代VSMCs用組織塊貼塊法,鑒定VSMC s用細(xì)胞免疫熒光染色;2.細(xì)胞增殖檢測用CCK-8法;3.細(xì)胞蛋白表達(dá)水平檢測用Western blot法。結(jié)果:1.原代培養(yǎng)及鑒定SHR及WKY來源的VSMC s。2.SHR-VSMCs和WKY-VSMCs中均有TRPV1表達(dá),與WKY-VSMCs相比,SHR-VSMC s中TRPV1蛋白表達(dá)顯著降低;應(yīng)用TRPV1激動(dòng)劑辣椒素可顯著上調(diào)SHR-VSMCs、WKY-VSMCs中TRPV1蛋白的表達(dá)。3.SHR-VSMC s的增殖能力強(qiáng)于WKY-VSMCs;辣椒素可呈劑量依賴性地抑制SHR-VSMC s增殖,TRPV1的拮抗劑iRTX可拮抗辣椒素抗增殖的作用;辣椒素輕度抑制WKY-VSMCs增殖,與對照組相比,沒有顯著差異。4.與WK Y-VSMC s相比,SHR-VSMCs中p-Akt水平顯著升高;辣椒素激活TRPV1可顯著降低WKY-VSMCs和SHR-VSMCs中p-Akt水平;TRPV1拮抗劑iRTX,則使WKY-VSMCs、SHR-VSMCs中p-Akt水平升高。5.PI3K的特異抑制劑LY294002,可顯著抑制SHR-VSMCs增殖;同單用辣椒素相比,LY294002+辣椒素組對SHR-VSMCs增殖的抑制作用無明顯差異;對于WKY-VSMCs增殖,LY294002的抑制作用不顯著。6.LY294002組、LY294002和辣椒素組均顯著降低WK Y和SHR-VSMC s中p-Akt的水平;LY294002和辣椒素組的p-Akt的水平,與單用辣椒素組相比,顯著降低。結(jié)論:激活TRPV1通過抑制Akt信號(hào)通路而抑制SHR-VSMCs的增殖。
【關(guān)鍵詞】：TRPV1 自發(fā)性高血壓大鼠 血管平滑肌細(xì)胞 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R544.1
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 大鼠血管平滑肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定13-21
• 2.1 材料與方法13-17
• 2.2 結(jié)果17-19
• 2.3 討論19-20
• 2.4 小結(jié)20-21
• 第三章 激活TRPV1抑制高血壓大鼠來源的血管平滑肌細(xì)胞增殖21-31
• 3.1 材料與方法22-27
• 3.2 結(jié)果27-28
• 3.3 討論28-30
• 3.4 小結(jié)30-31
• 第四章 激活TRPV1通過抑制PI3K/Akt信號(hào)通路抑制高血壓大鼠來源的血管平滑肌細(xì)胞增殖31-37
• 4.1 材料與方法32-33
• 4.2 結(jié)果33-35
• 4.3 討論35-36
• 4.4 小結(jié)36-37
• 全文結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 文獻(xiàn)綜述TRPV1和心血管重構(gòu)41-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文49-50
• 致謝50

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本文編號(hào)：354751