本文關(guān)鍵詞：PRMT2對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)VSMC增殖的調(diào)控作用及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2(PRMT2)是蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶家族成員之一,通過甲基化蛋白質(zhì)氨基酸序列中的精氨酸殘基參與調(diào)控機(jī)體多種細(xì)胞過程。最近有研究發(fā)現(xiàn)PRMT2可能在心血管疾病中發(fā)揮重要作用,PRMT2基因敲除小鼠與正常小鼠相比,在給予病理因素干擾后出現(xiàn)明顯的血管壁增厚、血管內(nèi)膜增生、血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)增殖現(xiàn)象。VSMC異常增殖是多種心血管疾病共同的病理特征,常伴隨心血管疾病發(fā)病進(jìn)程出現(xiàn)。引起VSMC異常增殖的誘因眾多,血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)則是誘導(dǎo)VSMC異常增殖的主要生物活性因子之一,AngⅡ可通過誘導(dǎo)血管內(nèi)炎癥反應(yīng)發(fā)生引起血管結(jié)構(gòu)炎性改變,促進(jìn)VSMC轉(zhuǎn)型、增殖。大量文獻(xiàn)報(bào)道,PRMT2在各種炎癥模型中表達(dá)均有顯著變化,PRMT2抑制炎癥反應(yīng)引起的細(xì)胞凋亡,影響炎癥反應(yīng)經(jīng)典信號(hào)通路NF-κB激活。研究發(fā)現(xiàn)NF-κB抑制蛋白(IκB-α)可能是PRMT2作用底物之一,我們推測PRMT2可能通過作用于IκB-α影響NF-κB信號(hào)通路及VSMC增殖�；诖�,本課題將深入探討PRMT2在AngⅡ誘導(dǎo)VSMC增殖中的作用及其作用機(jī)制。第一部分:AngⅡ?qū)SMC細(xì)胞內(nèi)PRMT2表達(dá)的影響目的:觀察AngⅡ?qū)SMC細(xì)胞內(nèi)PRMT2表達(dá)的影響實(shí)驗(yàn)方法:用不同濃度(0、0.01、1、100n M)AngⅡ處理人主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞不同時(shí)間(0、6、12、24h),MTT法檢測細(xì)胞增殖率、Western blot檢測PRMT2、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)蛋白表達(dá)量的變化,RT-PCR檢測PRMT2 m RNA的表達(dá)水平。結(jié)果:血管平滑肌細(xì)胞增殖率、PCNA蛋白表達(dá)量隨AngⅡ處理濃度增加而增加,PRMT2 m RNA、蛋白表達(dá)水平隨AngⅡ處理濃度增加而降低(P0.05);血管平滑肌細(xì)胞增殖率、PCNA蛋白表達(dá)量隨AngⅡ處理時(shí)間增加而增加,PRMT2 m RNA、蛋白表達(dá)水平隨AngⅡ處理濃度、時(shí)間增加而降低(P0.05)。小結(jié):AngⅡ濃度、時(shí)間依賴性下調(diào)VSMC中PRMT2的m RNA、蛋白表達(dá)。第二部分:PRMT2對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)VSMC增殖的影響目的:明確PRMT2在AngⅡ誘導(dǎo)VSMC增殖過程中的作用實(shí)驗(yàn)方法:構(gòu)建PRMT2過表達(dá)載體,設(shè)立空載體(vector)組、AngⅡ處理組、AngⅡ+PRMT2組;利用si RNA技術(shù)沉默PRMT2基因,設(shè)立陰性對(duì)照(NC)組、AngⅡ處理組、si PRMT2組、AngⅡ+si PRMT2組,MTT、流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞增殖率和周期變化,Western blot法檢測PRMT2、PCNA表達(dá)量。結(jié)果:與AngⅡ組相比,AngⅡ+PRMT2組G0/G1期比例增加(P0.05),細(xì)胞增殖率降低、S期比例下降、PCNA表達(dá)量減少(P0.05),過表達(dá)PRMT2可減弱AngⅡ誘導(dǎo)VSMC增殖的作用;si PRMT2組細(xì)胞增殖率、PCNA表達(dá)量及周期分布與NC組比較均無明顯變化,表明僅僅沉默PRMT2基因?qū)SMC增殖狀態(tài)無顯著影響;AngⅡ+si PRMT2組與AngⅡ組相比,PRMT2表達(dá)量下降(P0.05),細(xì)胞增殖率增加(P0.05),PCNA表達(dá)量、周期分布也有所增加,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明沉默PRMT2基因在一定程度上進(jìn)一步增強(qiáng)Ang II誘導(dǎo)VSMC增強(qiáng)的作用。小結(jié):PRMT2抑制AngⅡ誘導(dǎo)的VSMC增殖。第三部分:PRMT2影響VSMC增殖的機(jī)制目的:探討PRMT2影響VSMC增殖的機(jī)制實(shí)驗(yàn)方法:免疫熒光法檢測vector組、AngⅡ處理組、AngⅡ+PRMT2組NF-κB亞基p65細(xì)胞核內(nèi)外分布,Western blot檢測各組炎癥因子IL-1β、IL-6表達(dá)量以及IκB-α總蛋白量、磷酸化水平,免疫共沉淀法驗(yàn)證PRMT2和IκB-α的相互作用,ELISA法檢測各組培養(yǎng)基中甲基化產(chǎn)物ADMA含量。結(jié)果:與vector組比較,AngⅡ處理組細(xì)胞核內(nèi)p65熒光信號(hào)強(qiáng)度明顯增強(qiáng),IL-1β、IL-6表達(dá)量增加(P0.05),而與AngⅡ組比較,AngⅡ+PRMT2組核內(nèi)p65熒光強(qiáng)度顯著減弱,IL-1β、IL-6表達(dá)量減少(P0.05),表明PRMT2可有效阻礙p65向核內(nèi)轉(zhuǎn)移,抑制NF-κB激活及炎癥因子表達(dá);免疫共沉淀結(jié)果顯示PRMT2與IκB-α之間存在相互結(jié)合,PRMT2可能是通過作用于IκB-α影響了NF-κB從細(xì)胞質(zhì)向核內(nèi)轉(zhuǎn)移;與vector組比較,AngⅡ組IκB-α總蛋白量減少、磷酸化水平上調(diào),ADMA含量減少(P0.05),AngⅡ+PRMT2組與AngⅡ組相比,IκB-α總蛋白量增加、磷酸化水平下降,ADMA含量增加(P0.05),PRMT2可能是通過甲基化IκB-α阻礙IκB-α磷酸化及降解,抑制NF-κB激活及炎癥反應(yīng)發(fā)生,影響VSMC增殖。小結(jié):PRMT2可能通過甲基化IκB-α阻斷NF-κB信號(hào)通路、抑制AngⅡ誘導(dǎo)VSMC增殖結(jié)論:1.PRMT2可能在AngⅡ誘導(dǎo)VSMC增殖中起負(fù)調(diào)控作用。2.PRMT2可能通過甲基化IκB-α抑制NF-κB信號(hào)通路,從而負(fù)調(diào)控AngⅡ誘導(dǎo)的VSMC增殖。
【關(guān)鍵詞】：蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2 血管緊張素Ⅱ 血管平滑肌細(xì)胞 NF-κB IκB-α
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-15
• 專業(yè)名詞縮寫中英文對(duì)照表15-16
• 第1章 緒論16-20
• 第2章 材料20-22
• 2.1 主要試劑20-21
• 2.2 主要儀器21-22
• 第3章 主要方法22-30
• 3.1 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)及瞬時(shí)轉(zhuǎn)染22
• 3.2 MTT法檢測細(xì)胞增殖率22-23
• 3.3 免疫共沉淀法（co-IP）檢測蛋白之間的相互作用23-24
• 3.4 Western blot法檢測蛋白表達(dá)24-25
• 3.5 RT-PCR法檢測mRNA的表達(dá)25-27
• 3.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞生長周期27
• 3.7 免疫熒光法檢測NF-κB亞基p65蛋白分布27
• 3.8 ELISA法檢測ADMA含量27-28
• 3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28-30
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-42
• 4.1 AngⅡ濃度、時(shí)間依賴性促進(jìn)VSMC增殖30-31
• 4.2 AngⅡ使VSMC內(nèi)PRMT2 mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)31-32
• 4.3 過表達(dá)PRMT2可抑制AngⅡ誘導(dǎo)VSMC增殖32-35
• 4.4 PRMT2-siRNA沉默PRMT2基因?qū)ngⅡ誘導(dǎo)VSMC增殖的影響35-38
• 4.5 PRMT2抑制AngⅡ誘導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路激活38-39
• 4.6 PRMT2可能通過甲基化IκB-α抑制NF-κB信號(hào)通路激活39-42
• 第5章 討論42-46
• 5.1 AngⅡ誘導(dǎo)VSMC增殖模型構(gòu)建42-43
• 5.2 AngⅡ?qū)SMC內(nèi)PRMT2表達(dá)的影響43
• 5.3 PRMT2對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)VSMC增殖過程的影響43
• 5.4 PRMT2影響VSMC增殖的機(jī)制43-46
• 第6章 結(jié)論46-48
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 文獻(xiàn)綜述 精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2的研究進(jìn)展54-65
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 科研成果65-66
• 致謝66

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  本文關(guān)鍵詞：PRMT2對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)VSMC增殖的調(diào)控作用及其機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：286147