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《山西醫(yī)科大學(xué)》 2015年

缺氧時心肌細胞自噬的變化及其機理的研究

竇夢怡  

【摘要】：目的:通過對缺氧時H9C2心肌細胞自噬相關(guān)蛋白變化的觀察,證明自噬在缺氧時的變化和作用,以及HIF-1α可能與自噬有關(guān)。方法:1分組:1.1正常對照組:選用正常高糖(10%)DMEM培養(yǎng)基,三十七攝氏度、5%二氧化碳孵箱培養(yǎng)。不做處置。1.2缺氧組:選用不含糖無血清培養(yǎng)基做缺氧處理,無任何藥物添加。1.3 3-MA自噬抑制劑組:選用正常高糖(10%)DMEM培養(yǎng)基,加入3-MA自噬抑制劑,三十七攝氏度、5%二氧化碳孵箱培養(yǎng)。1.4缺氧+3-MA自噬抑制劑組:使用培養(yǎng)基為無糖無血清,抑制劑為3-MA自噬進行缺氧處理。2方法:通過Western Blot蛋白印記方法檢測細胞蛋白量表達。通過MTT細胞增殖試劑盒檢測細胞增殖抑制率。結(jié)果:通過對比空白對照、缺氧、自噬抑制和缺氧加自噬抑制四組蛋白中Lc3、m TOR、Bcl-2/Bax、HIF-1α蛋白量的比較,結(jié)果6h缺氧的情況下,自噬明顯變化。Lc3在缺氧后下降,6h變化最為明顯。m TOR對照組(1.0±0.04)vs缺氧組(2.30±0.20),P0.05,顯示m TOR在缺氧6h升高,與Lc3的結(jié)果一致。Bcl-2/Bax對照組(0.81±0.02)vs缺氧組(0.46±0.02),對照組(0.81±0.02)vs3-MA組(0.41±0.02),對照組(0.81±0.02)vs缺氧+3-MA組(0.29±0.20),缺氧組(0.46±0.02)vs缺氧+3-MA組(0.29±0.20),組間比較P0.05。MTT顯示缺氧后抑制率增加。顯示凋亡在缺氧,自噬抑制后凋亡進一步增加。HIF-1α對照組(1.04±0.06)vs缺氧組(1.52±0.02),對照組(1.04±0.06)vs缺氧+3-MA組(1.40±0.20),組間比較P0.05,顯示在缺氧后HIF-1α表達上升,缺氧組(1.52±0.02)vs缺氧+3-MA組(1.40±0.20),組間比較沒有統(tǒng)計學(xué)意義,可以推斷HIF-1α位于3-MA作用位點上游。進一步在HIF-1α和自噬下降之間存在聯(lián)系。結(jié)果SPSS17.0軟件分析,組件兩兩比較P0.05,組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義。認為實驗結(jié)果可證明HIF-1α參與了心肌細胞缺氧情況下自噬的變化。結(jié)論:1 LC3II/I于缺氧6h最為明顯,同時m TOR表達上升,證明缺氧時自噬下降。2 Bcl-2/Bax于缺氧后6h比值下降,證明心肌cell自噬減少,凋亡增加。自噬對細胞起保護作用。3 HIF-1α缺氧時增高,自噬抑制后無變化,考慮HIF-1α的變化與自噬的降低相關(guān),且位于上游。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R542.2
【目錄】：

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