發(fā)布時(shí)間：2016-11-23 01:09

  本文關(guān)鍵詞：依折麥布抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用及其機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《浙江大學(xué)》 2015年

依折麥布抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用及其機(jī)制研究

鐵春苗  

【摘要】：研究背景及目的 動(dòng)脈粥樣硬化是動(dòng)脈壁的慢性非感染性炎癥反應(yīng),動(dòng)脈粥樣硬化引起的心腦血管疾病是發(fā)達(dá)國(guó)家人群的主要死亡原因之一。本病是多因素疾病,內(nèi)皮損傷、血脂紊亂以及慢性炎癥是動(dòng)脈粥樣硬化病理形成的關(guān)鍵因素。降脂治療是目前預(yù)治動(dòng)脈粥樣硬化的基石,他汀類藥物已廣泛應(yīng)用于臨床動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病的預(yù)防和治療中。然而,部分患者在接受足量他汀藥物治療時(shí)仍無法將血漿LDL-C水平達(dá)標(biāo)。依折麥布為選擇性膽固醇吸收抑制劑,作用于小腸黏膜刷狀緣細(xì)胞,抑制食物膽固醇吸收,能有效降低血漿總膽固醇及LDL-C水平,但在動(dòng)脈粥樣硬化治療方面的療效及其可能機(jī)制尚存爭(zhēng)議。新近公布的IMPROVE-IT研究結(jié)果顯示依折麥布聯(lián)合辛伐他汀能使患者總體心血管事件風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)一步降低6.4%�，F(xiàn)有動(dòng)脈粥樣硬化方面的研究都是在他汀基礎(chǔ)上聯(lián)合依折麥布,單用依折麥布在動(dòng)脈粥樣硬化方面的實(shí)驗(yàn)研究罕有報(bào)道。本課題在apoE基因敲除的雄性小鼠中建立動(dòng)脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?研究依折麥布單用或者與阿托伐他汀聯(lián)合對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的作用,并就其對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)理進(jìn)行探索,為動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病的治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),指導(dǎo)臨床治療。 實(shí)驗(yàn)方法 我們購(gòu)買60只8-12周齡的apoE基因敲除雄性小鼠,均予高脂飲食并預(yù)適應(yīng)無創(chuàng)尾動(dòng)脈血壓監(jiān)測(cè)1周后進(jìn)入實(shí)驗(yàn),隨機(jī)分成4組,每組15只。對(duì)照組予等量空白無菌水灌胃,每天一次；阿托伐他汀組：給予含阿托伐他汀(20mg/kg/day)的無菌水灌胃,每天一次,依折麥布組：給予含依折麥布(10mg/kg/d ay)的無菌水灌胃,每天一次；阿托伐他汀+依折麥布組：給予含阿托伐他汀(20mg/kg/day)+依折麥布(10mg/kg/d ay)的無菌水灌胃,每天一次。實(shí)驗(yàn)過程中,每周固定時(shí)間稱量體重1次,實(shí)驗(yàn)開始(0周)和實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)(4周)應(yīng)用Kent無創(chuàng)血壓監(jiān)測(cè)系統(tǒng)分別進(jìn)行無創(chuàng)尾動(dòng)脈血壓監(jiān)測(cè),統(tǒng)計(jì)小鼠死亡率,繪制小鼠生存曲線,進(jìn)行尸體解剖以明確死因。28天后處死實(shí)驗(yàn)小鼠,留取血液,并收集主動(dòng)脈組織標(biāo)本。分離獲得小鼠血清,分別進(jìn)行血脂監(jiān)測(cè)(總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、甘油三酯)、肝功能指標(biāo)(谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶)和炎癥因子(單核細(xì)胞趨化因子-1、血清腫瘤壞死因子a、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1)。應(yīng)用EN Face技術(shù)和Image Pro圖像軟件定量分析實(shí)驗(yàn)小鼠主動(dòng)脈弓部總面積、粥樣硬化斑塊面積以及粥樣硬化面積占動(dòng)脈總面積的百分比(%)。留取小鼠主動(dòng)脈根部組織,從主動(dòng)脈弓向主動(dòng)脈竇方向,以每層10μm的厚度對(duì)主動(dòng)脈組織進(jìn)行連續(xù)切片,利用油紅O病理染色方法顯示主動(dòng)脈根部粥樣硬化組織中中性脂肪,利用Image Pro圖像軟件定量分析主動(dòng)脈根部組織中粥樣硬化斑塊的分布及其面積。利用免疫組織化學(xué)染色方法半定量分析小鼠粥樣硬化斑塊中細(xì)胞成分變化(主要為巨噬細(xì)胞含量)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)選取的60只apoE基因敲除雄鼠中,因灌胃方法不當(dāng)死亡共21只(死亡率35%,21/60),至實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)共存活小鼠39只(存活率65%,39/60)。高脂飲食28天,實(shí)驗(yàn)小鼠體重平均增加4.1±0.3克,各組間小鼠體重變化量無顯著差異(P0.05)。阿托伐他汀組小鼠在實(shí)驗(yàn)前后體重增加2.6±0.7克,與對(duì)照組(4.7±0.3克)和依折麥布+阿托伐他汀組(4.8±0.7克)間均無顯著差異(P0.05)。在實(shí)驗(yàn)過程中,依折麥布單用或者聯(lián)合阿托伐他汀均不影響小鼠的平均收縮壓。(P0.05)。 依折麥布和阿托伐他汀均能顯著降低apoE基因敲除雄鼠血清總膽固醇(TC,P0.001)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C,P0.001)和高密度脂蛋白膽固醇水平(HDL-C,P0.05),但均不能改變小鼠血清甘油三酯(P0.05)。為排除藥物對(duì)肝臟損傷,利用酶法檢測(cè)顯示依折麥布單用和聯(lián)合阿托伐他汀均不影響小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶水平(P0.05)。 為研究依折麥布抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用,各組小鼠主動(dòng)脈弓部和根部的動(dòng)脈粥樣硬化面積進(jìn)行定量分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),依折麥布單用或與阿托伐他汀聯(lián)合應(yīng)用顯著減少主動(dòng)脈弓部面積,動(dòng)脈粥樣硬化面積以及動(dòng)脈粥樣硬化面積占主動(dòng)脈弓部面積百分比(P值均0.001)。但是,依折麥布聯(lián)合阿托伐他汀與單獨(dú)應(yīng)用依折麥布或者阿托伐他汀相比,并沒有進(jìn)一步減少主動(dòng)脈弓部,動(dòng)脈粥樣硬化面積以及動(dòng)脈粥樣硬化面積占主動(dòng)脈弓部面積百分比(P值均0.05)。與主動(dòng)脈弓部結(jié)果一致,依折麥布單用或聯(lián)合阿托伐他汀顯著減少主動(dòng)脈根部動(dòng)脈粥樣硬化面積(P值均0.001)。同樣,依折麥布聯(lián)合阿托伐他汀與單獨(dú)應(yīng)用依折麥布或者阿托伐他汀相比,并沒有進(jìn)一步減少主動(dòng)脈根部動(dòng)脈粥樣硬化面積(P值均0.05)。 為進(jìn)一步探索依折麥布抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制,血清炎癥因子和局部斑塊內(nèi)炎癥細(xì)胞含量進(jìn)行定量分析。利用ELISA法檢測(cè)小鼠血清炎癥因子,發(fā)現(xiàn),依折麥布單用或與阿托伐他汀聯(lián)合應(yīng)用顯著降低小鼠血清單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)和血清腫瘤壞死因子α濃度(TNF-α,P值均0.01),但是不影響血清轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1濃度(TGF-β1, P0.05)。與動(dòng)脈粥樣硬化結(jié)果一致的是,依折麥布聯(lián)合阿托伐他汀與單獨(dú)應(yīng)用依折麥布或者阿托伐他汀相比,并沒有進(jìn)一步減少血清MCP-1和TNF-α濃度(P值均0.05)。利用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)和半定量分析方法,發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組小鼠相比,依折麥布單用或聯(lián)合阿托伐他汀組小鼠局部粥樣硬化斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞含量顯著減少(P值均0.01)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論 本研究發(fā)現(xiàn)：(1)依折麥布單用或聯(lián)合阿托伐他汀在高脂喂食的apoE基因敲除雄鼠中均具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。(2)依折麥布單用或聯(lián)合阿托伐他汀均能顯著降低apoE基因敲除小鼠的總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇,但不影響小鼠甘油三酯。(3)依折麥布抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用不僅依賴于其降脂療效,而且還通過其抗炎相關(guān),包括降低血清MCP-1和TNF-α水平,以及減少局部粥樣硬化斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞含量。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R543.5
【目錄】：

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