【摘要】：目的:建立雙抗體夾心法ELISA檢測HEV抗原,用于定量檢測戊型肝炎p179疫苗生產(chǎn)過程中初制品、半成品和疫苗成品。方法:將單克隆抗體3G1、5G5、1G10、3A10和4E9分別進(jìn)行辣根過氧化物酶標(biāo)記,通過競爭ELISA檢測確定最佳抗體配對用于建立雙抗體夾心法ELISA,對p179生產(chǎn)過程中所得制品進(jìn)行抗原定量檢測。結(jié)果:5種單克隆抗體可以分成兩組,分別針對p179疫苗抗原上的兩種不同抗原表位,選擇3G1為包被抗體、4E9為酶標(biāo)抗體建立的雙抗體夾心法ELISA具有良好的敏感性和特異性,對p179抗原檢測的最低濃度可至15.6 ng·ml-1。該方法能夠有效檢測p179疫苗生產(chǎn)過程中的初制品、半成品和疫苗成品的抗原含量,反映抗原純化各步驟的得率。結(jié)論:建立的雙抗體夾心法ELISA可作為p179疫苗生產(chǎn)過程中的抗原檢測方法,這有助于定量檢測p179疫苗生產(chǎn)過程中的抗原成分。
[Abstract]:Objective: to establish a double antibody sandwich Elisa for the quantitative detection of HEV antigen in the production of hepatitis E p179 vaccine. Methods: horseradish peroxidase was labeled with monoclonal antibody 3G1G5G10A10 and 4E9 respectively. The best pair of antibodies was determined by competitive Elisa to establish the double antibody sandwich method ELISA.The products obtained in the production of p179 were detected quantitatively by antigen. Results five kinds of monoclonal antibodies could be divided into two groups. The double antibody sandwich Elisa with 3G1 as the coated antibody and 4E9 as the enzyme labeled antibody had good sensitivity and specificity for the two different epitopes of p179 vaccine antigen. The lowest concentration of p179 antigen was 15.6 ng / ml ~ (-1). This method can effectively detect the antigen content of the primary, semi-finished and vaccine products in the production of p179 vaccine, and reflect the yield of each step of antigen purification. Conclusion: the double antibody sandwich Elisa can be used as an antigen detection method in the production of p179 vaccine, which is helpful to quantitatively detect the antigen components in the production of p179 vaccine.
【作者單位】： 東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院;長春生物制品研究所有限責(zé)任公司;
【基金】：國家863疫苗重點(diǎn)項(xiàng)目(2006AA02A235) 東南大學(xué)國家大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計劃項(xiàng)目(1210286097)
【分類號】：R512.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2124944