【摘要】：【目的】:研究內(nèi)源性甲狀旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)和Notch信號(hào)通路對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的影響,并探討其調(diào)節(jié)機(jī)制�！痉椒ā�:體內(nèi)實(shí)驗(yàn)選用8周齡PTH野生型(WT,PTH+/+)和PTH基因敲除(KO,PTH-/-)小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,分離小鼠脛骨,用免疫組化檢測成骨相關(guān)指標(biāo)以及Notch信號(hào)通路受體和配體的表達(dá)。培養(yǎng)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化,分別在誘導(dǎo)后的3天、7天、10天、14天,用Western-blot方法檢測Notch信號(hào)通路受體和配體的表達(dá);分別在誘導(dǎo)后的3天、7天、14天用Western-blot方法檢測成骨指標(biāo)Runx2、骨鈣素(OCN)的表達(dá)。培養(yǎng)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化3d后,分別加入PTH、dbc AMP、蛋白激酶A(PKA)抑制劑H89,用Western-blot方法檢測Notch信號(hào)通路受體和配體以及成骨指標(biāo)Runx2的表達(dá)。誘導(dǎo)分化7d后,檢測細(xì)胞中ALP活性�！窘Y(jié)果】:內(nèi)源性PTH缺乏引起成骨細(xì)胞骨形成障礙。免疫組化顯示,在野生型組小鼠脛骨骨小梁表面的成骨細(xì)胞數(shù)、相關(guān)成骨指標(biāo)I型膠原(Col-I)以及Notch信號(hào)通路受體和配體的表達(dá)高于PTH基因敲除組。在野生型組和PTH基因敲除組小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中,Notch信號(hào)通路的受體和配體以及各成骨指標(biāo)上調(diào)。PTH基因敲除組中Notch信號(hào)通路配體Jagged1和受體Notch1表達(dá)明顯低于野生型組。PTH基因敲除組中各成骨相關(guān)指標(biāo)Runx2、OCN蛋白表達(dá)均低于野生型組。誘導(dǎo)分化3d后,Western blot檢測顯示PTH基因敲除組Notch信號(hào)通路受體、配體和Runx2表達(dá)均低于野生型組;加入PTH、dbc AMP刺激后Notch信號(hào)通路受體、配體和Runx2表達(dá)上調(diào),而加入PKA抑制劑H89后相關(guān)蛋白表達(dá)被抑制。誘導(dǎo)7天后,PTH基因敲除組成骨細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性較WT組低,加入PTH或dbc AMP后ALP活性上調(diào),而H89能消除PTH及dbc AMP的作用�！窘Y(jié)論】:內(nèi)源性PTH通過c AMP/PKA通路提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中Notch信號(hào)通路的表達(dá),通過Jagged1/Notch1通路,使Runx2表達(dá)增高,進(jìn)而促進(jìn)成骨細(xì)胞分化,增強(qiáng)成骨細(xì)胞功能。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R580;R683

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1 張冬;于占革;;Notch信號(hào)通路與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年22期

2 孟曉;宋穎;劉云鵬;楊向紅;;大鼠骨髓源內(nèi)皮祖細(xì)胞分化過程N(yùn)otch信號(hào)通路活化及欖香烯干預(yù)機(jī)制的探討[J];中華腫瘤防治雜志;2012年07期

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本文編號(hào)：2763211