本文關(guān)鍵詞：MGF納米微球靜電紡絲材料對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

  更多相關(guān)文章： 力生長因子 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 納米微球 納米材料 組織工程

【摘要】：載體支架、種子細(xì)胞、生物活性因子已成為組織工程三大重要因素。本課題以Yang等發(fā)現(xiàn)并命名的細(xì)胞對力刺激響應(yīng)的產(chǎn)物——力生長因子（mechano-growth factor，MGF）為生物活性因子，采用靜電紡絲技術(shù)（electrospinning）及相分離法制備了基于聚已內(nèi)酯（polycaprolactone，PCL）的含MGF的葡聚糖納米微球的纖維支架，采用從人的骨髓中提取的間充質(zhì)干細(xì)胞（human bone mesenchymalstem cells，hBMSC）為種子細(xì)胞，從hBMSC生物學(xué)行為的差異來研究葡聚糖微球?qū)GF生物活性的保護(hù)作用。 本課題主要包括以下幾方面的內(nèi)容： ①hBMSC原代分離培養(yǎng)及鑒定 利用密度梯度離心法，分離培養(yǎng)hBMSCs，觀察細(xì)胞形態(tài)，采用CD34、CD73、CD14、CD90和CD105抗體熒光染色后流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志，，同時檢測細(xì)胞周期狀態(tài)，確定細(xì)胞純度；使用脂肪分化、成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)細(xì)胞多向分化，證實細(xì)胞的多向分化潛能，為后續(xù)的細(xì)胞實驗提供種子細(xì)胞支持。 ②MGF納米微球的制備和表征 采取相分離法制備空微球和含MGF的納米微球（MGF-Loaded dextran glassynanoparticles，MGF-DGNs），并采用場發(fā)射掃描電鏡觀察微球形態(tài)，為后續(xù)電紡纖維支架做準(zhǔn)備。 ③靜電紡絲材料的制備和表征 采用靜電紡絲技術(shù)，制備四種纖維支架，分別是單純PCL溶液電紡（P）；加200μgMGF水溶液于PCL溶液中攪拌均勻后電紡（PM）；PCL溶液中加100mg葡聚糖空微球攪拌均勻后電紡（PD）；加100mg含了200μgMGF的葡聚糖微球到PCL溶液中攪拌均勻后電紡（PDM）。并通過場發(fā)射掃描電鏡（FESEM）、透射電鏡（TEM）、傅里葉紅外光譜（FTIR）、比表面積及孔隙度分析儀等表征手段檢測支架的表面形貌及理化性質(zhì)。 ④MGF對hBMSC生物學(xué)行為的影響 在P、PM、PD、PDM四種不同的纖維支架上分別種植hBMSC，采用酶標(biāo)儀和激光共聚焦顯微鏡（CLSM），觀察細(xì)胞在材料表面的增殖與遷移情況，檢測材料中釋放的MGF對hBMSC生物學(xué)行為的影響。 本課題研究結(jié)果表明含MGF的納米微球支架能夠顯著促進(jìn)hBMSC增殖和遷移，熒光實時定量PCR檢測在PDM材料上面的hBMSC中MGF高表達(dá)。此靜電紡絲納米纖維能夠較好的保護(hù)MGF的活性，有望在組織工程領(lǐng)域得到應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】：力生長因子 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 納米微球 納米材料 組織工程
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 1 緒論9-19
• 1.1 問題的提出9-10
• 1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀10-17
• 1.2.1 力生長因子研究進(jìn)展10-15
• 1.2.2 可降解高分子微球緩釋載體研究進(jìn)展15-16
• 1.2.3 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞研究進(jìn)展16-17
• 1.3 本文研究的目的、意義及主要內(nèi)容17-19
• 1.3.1 研究目的及意義17
• 1.3.2 研究內(nèi)容17-19
• 2 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)及鑒定19-26
• 2.1 引言19
• 2.2 儀器和材料19-21
• 2.2.1 實驗儀器19-20
• 2.2.2 實驗材料20
• 2.2.3 主要試劑的配制20-21
• 2.3 實驗方法21-22
• 2.3.1 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)21
• 2.3.2 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞特性分析21-22
• 2.3.3 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化能力的檢測22
• 2.4 結(jié)果與分析22-25
• 2.4.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)觀察22-23
• 2.4.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的表型鑒定23-25
• 2.5 本章小結(jié)25-26
• 3 納米微球的制備及表征26-29
• 3.1 引言26
• 3.2 儀器和材料26-27
• 3.2.1 實驗儀器26-27
• 3.2.2 實驗材料27
• 3.3 實驗方法27
• 3.3.1 納米微球的制備27
• 3.3.2 納米微球的表征27
• 3.4 結(jié)果與分析27-28
• 3.5 本章小結(jié)28-29
• 4 MGF 納米微球靜電紡絲材料的制備及表征29-38
• 4.1 引言29-30
• 4.2 儀器和材料30-31
• 4.2.1 實驗儀器30
• 4.2.2 實驗材料30
• 4.2.3 主要試劑的配制30-31
• 4.3 實驗方法31-32
• 4.3.1 靜電紡絲纖維支架的制備31
• 4.3.2 場發(fā)射掃描電鏡觀察31
• 4.3.3 透射電鏡觀察31
• 4.3.4 傅里葉紅外光譜檢測31
• 4.3.5 材料厚度檢測31
• 4.3.6 比表面積及孔隙率檢測31
• 4.3.7 數(shù)據(jù)分析31-32
• 4.4 結(jié)果與分析32-36
• 4.4.1 材料表面形態(tài)32-33
• 4.4.2 材料物理性質(zhì)33-34
• 4.4.3 比表面積及孔隙度分析34-36
• 4.4.4 材料厚度分析36
• 4.5 本章小結(jié)36-38
• 5 靜電紡絲材料對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為的影響38-47
• 5.1 引言38
• 5.2 儀器和材料38-39
• 5.2.1 實驗儀器38-39
• 5.2.2 實驗材料39
• 5.3 實驗方法39-42
• 5.3.1 掃描電鏡觀察39-40
• 5.3.2 免疫熒光染色40
• 5.3.3 細(xì)胞增殖分析40
• 5.3.4 細(xì)胞浸潤分析40-41
• 5.3.5 RT-qPCR 檢測 MGF 表達(dá)41-42
• 5.3.6 數(shù)據(jù)分析42
• 5.4 結(jié)果與分析42-46
• 5.4.1 細(xì)胞表面形貌觀察42-44
• 5.4.2 細(xì)胞增殖檢測44
• 5.4.3 細(xì)胞遷移分析44-45
• 5.4.4 RT-qPCR 檢測 MGF 表達(dá)45-46
• 5.5 本章小結(jié)46-47
• 6 結(jié)論與展望47-49
• 6.1 主要結(jié)論及創(chuàng)新47-48
• 6.2 后續(xù)工作展望48-49
• 致謝49-50
• 參考文獻(xiàn)50-57
• 附錄57-58
• A. 縮略語表57-58
• B. 作者在攻讀碩士學(xué)位期間科研及發(fā)表的論文目錄58

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：601341