本文關(guān)鍵詞：ADSCs復(fù)合PRF修復(fù)家兔耳軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 異體脂肪干細(xì)胞 富血小板纖維蛋白 軟骨缺損修復(fù) 免疫排斥

【摘要】：【背景】 根據(jù)國(guó)家疾控中心的不完全統(tǒng)計(jì)，因疾病和外傷導(dǎo)致的軟骨缺損發(fā)生率約為1.5%-3%，隨著運(yùn)動(dòng)意識(shí)的提高，以及交通等意外事故的增加，其發(fā)生率逐年遞增。雖然目前也有許多治療軟骨缺損的方法，如自體軟骨移植、異體軟骨移植以及人工合成生物材料等，但總是不太理想，要么取材不便，要么不易操作，并且花費(fèi)太大。組織工程為軟骨損傷修復(fù)提供了新的選擇，操作方便、安全有效、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的軟骨缺損修復(fù)方法正在被廣泛研究與探索。本課題就是以方便、安全、有效、經(jīng)濟(jì)為宗旨，嘗試將未誘導(dǎo)的自體或異體ADSCs與PRF復(fù)合作為一種軟骨修復(fù)材料，研究其對(duì)家兔耳軟骨全層缺損的修復(fù)作用，為以后組織工程軟骨的進(jìn)一步研究打下基礎(chǔ)。 【目的】 將未誘導(dǎo)的自體或異體脂肪干細(xì)胞（ADSCs）與富血小板纖維蛋白（PRF）復(fù)合，作為一種全新的軟骨修復(fù)材料，探討其對(duì)家兔耳軟骨全層缺損修復(fù)的可行性，并檢測(cè)其免疫排斥反應(yīng)。 【方法】 1、采用組織分離培養(yǎng)法從家兔背部脂肪中獲取ADSCs進(jìn)行培養(yǎng)，將獲得的細(xì)胞進(jìn)行HE染色、成脂肪及成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)，并使用FCM對(duì)干細(xì)胞分子表型進(jìn)行鑒定，最后將目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行大量的體外培養(yǎng)，供移植使用。 2、制備家兔PRF，并與培養(yǎng)的ADSCs復(fù)合作為一種軟骨缺損修復(fù)材料備用。 3、建立軟骨缺損動(dòng)物模型。在家兔耳廓做出一個(gè)軟骨全層缺損的創(chuàng)傷，使用ADSCs與PRF復(fù)合物移植修復(fù)，通過大體觀察與組織學(xué)觀察（HE和阿爾新蘭染色）的方法觀察軟骨缺損的修復(fù)情況。 4、實(shí)驗(yàn)分組。取家兔30只，于每只家兔耳部做4處軟骨全層缺損，隨機(jī)分為6組，A組，作為空白對(duì)照；B組植入自體ADSCs；C組植入異體ADSCs；D組植入自體PRF；E組植入自體ADSCs與PRF的復(fù)合物；F組植入異體ADSCs與PRF的復(fù)合物。分別于術(shù)后1月、2月、3月取材，進(jìn)行大體、HE染色及阿爾新蘭染色觀察，并使用IPP6.0軟件對(duì)軟骨生成量進(jìn)行半定量分析。 5、免疫學(xué)檢測(cè)。分別取實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)后1w、2w、4w、3月的家兔全血和血漿，流式細(xì)胞儀進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞CD4和CD8亞群的檢測(cè)，ELISA法測(cè)定血漿中IL-2和IL-4的水平。 6、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)使用SPSS16.0軟件統(tǒng)計(jì)分析處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）形式表示，多個(gè)樣本均數(shù)比較用方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α值取雙側(cè)0.05. 【結(jié)果】 1、該實(shí)驗(yàn)分離獲取培養(yǎng)的ADSCs形態(tài)呈現(xiàn)為長(zhǎng)梭形，自我更新和增殖能力強(qiáng)，表達(dá)脂肪干細(xì)胞特異性的表面抗原CD29，其陽性表達(dá)率為（91.2±2.9）%，而CD31陰性表達(dá)，表達(dá)率為（2.9±1.5）%，且可向成脂和成骨的方向分化，其生物學(xué)特性穩(wěn)定。 2、制備的PRF形態(tài)良好，質(zhì)地韌，，有彈性，易于進(jìn)行移植實(shí)驗(yàn)。 3、動(dòng)物模型成功建立。大體觀察，HE和阿爾新蘭染色均顯示，模型建立3個(gè)月后軟骨缺損區(qū)無新生軟骨形成，表明軟骨缺損動(dòng)物模型成功建立。 4、移植后效果觀察結(jié)果。大體及組織學(xué)觀察顯示，3月后，A組無新生軟骨生成，軟骨缺損無修復(fù)跡象；B組和C組在缺損區(qū)邊緣均可見到少量的新生軟骨組織，但缺損區(qū)仍很明顯，與空白對(duì)照組相似；D組，大體觀察見缺損區(qū)有一層膜狀物形成，組織學(xué)觀察見新生軟骨組織較多，對(duì)缺損有一定的修復(fù)作用；E組和F組，可見缺損區(qū)被新生軟骨組織覆蓋，表面光滑，與周圍軟骨組織融合一致，修復(fù)效果最佳。IPP6.0統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，移植物植入3月后，A組軟骨缺損修復(fù)率為（1.68±0.17）%， B組為（15.9±0.87）%、C組為（15.4±0.91.）%，D組為（32.0±2.76）%，E組為（87.59±3.21）%、F組為（85.77±4.88）%。SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，B組與C組之間（P0.05）、E組與F組之間（P0.05），組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可以認(rèn)為自體ADSCs組與異體ADSCs組兩組之間的修復(fù)效果無差異，自體ADSCs復(fù)合PRF組與異體ADSCs復(fù)合PRF組兩組之間的修復(fù)效果無差異；空白對(duì)照組、ADSCs組、PRF組、ADSCs復(fù)合PRF組，各組間（P0.01）,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明四組間修復(fù)效果均存在顯著性差異。 5、免疫學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，異體ADSCs參與的組織修復(fù)實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在修復(fù)材料植入前與植入后測(cè)得的淋巴細(xì)胞CD4和CD8亞群、CD4/CD8比值和IL-2、IL-4的值，在不同時(shí)間點(diǎn)所測(cè)值的變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）；HE染色結(jié)果同樣顯示：異體ADSCs植入?yún)^(qū)的組織中并無淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，均表明異體ADSCs的植入沒有引起明顯的免疫排斥反應(yīng)。 【結(jié)論】 1.該實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)獲取的細(xì)胞確為ADSCs，具有自我增殖能力，并有多向分化潛能，可以作為組織工程的種子細(xì)胞來源。 2.該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型易于操作，便于觀察，是一種理想的軟骨缺損實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。 3.自體或異體ADSCs復(fù)合PRF均能夠有效的修復(fù)家兔耳軟骨全層缺損，且二者的修復(fù)效果沒有差異。 4.異體ADSCs移植不會(huì)引起明顯的免疫排斥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：異體脂肪干細(xì)胞 富血小板纖維蛋白 軟骨缺損修復(fù) 免疫排斥
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R783.1
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-13
• 文獻(xiàn)回顧13-20
• 實(shí)驗(yàn)一 ADSCs 的體外分離、培養(yǎng)及鑒定20-27
• 1 材料20-21
• 2 方法21-24
• 3 結(jié)果24-25
• 4 討論25-27
• 實(shí)驗(yàn)二 ADSCs 復(fù)合 PRF 在家兔耳軟骨區(qū)生長(zhǎng)分化的實(shí)驗(yàn)觀察27-32
• 1 材料27
• 2 方法27-29
• 3 結(jié)果29
• 4 討論29-32
• 實(shí)驗(yàn)三 ADSCs 復(fù)合 PRF 修復(fù)家兔耳軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究32-46
• 1 材料32
• 2 方法32-35
• 3 結(jié)果35-42
• 4 討論42-46
• 全文總結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-56
• 附錄56-64
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果64-65
• 致謝65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 婁思權(quán);軟骨修復(fù)和重建基礎(chǔ)研究的現(xiàn)狀[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2001年01期

2 孫曉龍;李青;;脂肪干細(xì)胞的研究及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年09期

3 程少文;彭磊;王偉;林忠勤;陳慶玉;張偉;寇冬權(quán);;關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)研究新進(jìn)展[J];國(guó)際骨科學(xué)雜志;2010年05期

4 楊世茂;王明國(guó);;富血小板纖維蛋白的研究進(jìn)展[J];國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2012年03期

5 俞云飛;徐宏光;宋俊興;;力學(xué)刺激對(duì)軟骨細(xì)胞影響研究進(jìn)展[J];國(guó)際骨科學(xué)雜志;2012年05期

6 張勇;趙建寧;;脂肪干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2009年10期

7 宇麗;;軟骨組織工程研究[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2011年06期

8 賀明;陳洪亮;王大鵬;付勤;;SOX-9和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1共同誘導(dǎo)大鼠脂肪干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2009年02期

9 申財(cái)芳;林月秋;譚洪波;;關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)材料研究進(jìn)展[J];西南軍醫(yī);2011年02期

10 羅曉丁;李丹;張劍明;;富血小板纖維蛋白促進(jìn)組織愈合機(jī)制的探討[J];中國(guó)口腔種植學(xué)雜志;2011年04期

本文編號(hào)：584516