本文關(guān)鍵詞：兔尿源性干細(xì)胞復(fù)合小腸粘膜下層脫細(xì)胞基質(zhì)構(gòu)建組織工程尿道的研究

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【摘要】：尿道損傷的病因包括創(chuàng)傷、先天性畸形、感染等,臨床上主要表現(xiàn)為尿道狹窄、閉鎖或缺失,導(dǎo)致排尿功能障礙,甚至可使膀胱、腎臟功能受損,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。尿道狹窄的治療措施包括包括尿道擴(kuò)張、尿道內(nèi)放置支架、尿道內(nèi)切開(kāi)、尿道端-端吻合和尿道成形術(shù)等。其中,尿道端-端吻合術(shù)能解決長(zhǎng)度小于2cm的狹窄。但當(dāng)尿道狹窄長(zhǎng)度大于2cm時(shí),直接采用狹窄段切除、端-端吻合的常規(guī)手術(shù)方法,會(huì)導(dǎo)致陰莖彎曲、勃起疼痛。因此,對(duì)于長(zhǎng)度大于2cm的尿道狹窄須采用新的尿道替代材料進(jìn)行尿道的修復(fù)與重建。目的：長(zhǎng)段尿道的狹窄或缺失是臨床上泌尿外科醫(yī)生面臨的一個(gè)比較棘手的難題,組織工程技術(shù)是解決這一難題的途徑之一。本研究擬以誘導(dǎo)分化后的尿源性干細(xì)胞(USCs)為種子細(xì)胞,經(jīng)5%過(guò)氧乙酸(PAA)氧化脫細(xì)胞處理的小腸粘膜下層脫細(xì)胞基質(zhì)(SIS)為支架,于體外構(gòu)建成組織工程尿道,為后續(xù)長(zhǎng)段尿道損傷的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究提供尿道修復(fù)材料。方法：通過(guò)無(wú)菌導(dǎo)尿術(shù)收集6只健康成年雄性新西蘭大白兔(體重2.0～2.5kg之間)尿液。采用離心分離法分離尿源性干細(xì)胞,于體外誘導(dǎo)其向尿路上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞方向分化；取健康豬小腸,物理方法獲取小腸粘膜下層,系統(tǒng)比較經(jīng)不同濃度過(guò)氧乙酸(PAA)氧化脫細(xì)胞處理的SIS的體外機(jī)械性能、殘余DNA量、殘余生長(zhǎng)因子含量、電鏡檢測(cè)、切片染色及細(xì)胞粘附性等結(jié)果,確定SIS的最佳制備方法；于體外將誘導(dǎo)分化的上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞作為種子細(xì)胞種以“分層共培養(yǎng)”的方式在動(dòng)態(tài)的環(huán)境下種植于SIS上,通過(guò)組織切片染色等相關(guān)組織學(xué)檢查檢測(cè)細(xì)胞于SIS上的復(fù)合效果。結(jié)果：經(jīng)5%PAA氧化脫細(xì)胞處理的SIS脫細(xì)胞徹底,組織間孔隙多,內(nèi)部疏松,更有利于種子細(xì)胞粘附、滲透、增殖和分化,可作為組織工程尿道的支架材料；與靜態(tài)培養(yǎng)環(huán)境相比,動(dòng)態(tài)培養(yǎng)環(huán)境加強(qiáng)了細(xì)胞在SIS的滲透作用,“分層共培養(yǎng)”使細(xì)胞能夠形成多層的生長(zhǎng)狀態(tài),以此方式構(gòu)建的組織工程尿道,使尿源性干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的尿路上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞能以類似尿道組織細(xì)胞分布層次的形式種植進(jìn)SIS內(nèi),所構(gòu)建的組織工程尿道與真實(shí)尿道結(jié)構(gòu)更加相似。結(jié)論：采用經(jīng)5%PAA氧化脫細(xì)胞處理的SIS作為支架材料,USCs為種子細(xì)胞,以“分層共培養(yǎng)”+動(dòng)態(tài)培養(yǎng)的方式所構(gòu)建的組織工程尿道,可作為尿道修復(fù)或重建的一種新型尿道替代材料。
【關(guān)鍵詞】：尿源性干細(xì)胞 組織工程尿道 小腸粘膜下層
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R699;R318.08
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 第一章 兔USCs原代培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化11-31
• 1.1 兔尿液的收集及USCs的分離培養(yǎng)11-13
• 1.1.1 材料11-12
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法12-13
• 1.2 兔USCs生長(zhǎng)曲線的測(cè)定13-14
• 1.2.1 材料13-14
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法14
• 1.3 兔USCs體外向上皮細(xì)胞(UCs)和平滑肌細(xì)胞(SMCs)方向誘導(dǎo)14-17
• 1.3.1 材料14-15
• 1.3.2 實(shí)驗(yàn)方法15-17
• 1.4 USCs誘導(dǎo)分化細(xì)胞的鑒定17-23
• 1.4.1 材料17-19
• 1.4.2 實(shí)驗(yàn)方法19-23
• 1.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-29
• 1.5.1 兔尿液的收集及USCs的分離培養(yǎng)23-26
• 1.5.2 兔尿源性干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線26
• 1.5.3 兔尿源性干細(xì)胞多潛能分化(上皮分化和平滑肌分化)26-27
• 1.5.4 兔USCs誘導(dǎo)分化的細(xì)胞鑒定27-29
• 1.6 討論29-31
• 1.6.1 兔尿源形干細(xì)胞(USCs)29
• 1.6.2 尿源性干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞29-31
• 第二章 小腸粘膜下層脫細(xì)胞基質(zhì)(SIS)的制備與檢測(cè)31-46
• 2.1 小腸粘膜下層脫細(xì)胞基質(zhì)(SIS)的制備31
• 2.1.1 材料31
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法31
• 2.2 SIS電鏡掃描觀察31-32
• 2.3 SIS的HE檢測(cè)32-33
• 2.3.1 材料32
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)方法32-33
• 2.4 SIS的Hoechst染色33-34
• 2.4.1 材料33
• 2.4.2 實(shí)驗(yàn)方法33-34
• 2.5 經(jīng)不同濃度PAA氧化脫細(xì)胞處理的SIS單軸力學(xué)拉伸實(shí)驗(yàn)測(cè)定34-35
• 2.5.1 材料34
• 2.5.2 實(shí)驗(yàn)方法34-35
• 2.6 經(jīng)不同濃度PAA處理的SIS的殘余DNA量測(cè)定35-36
• 2.6.1 材料35
• 2.6.2 實(shí)驗(yàn)方法35-36
• 2.7 經(jīng)不同濃度PAA處理的SIS的生長(zhǎng)因子TGF-β、VEGF的殘余量測(cè)定36-37
• 2.7.1 材料36
• 2.7.2 實(shí)驗(yàn)方法36-37
• 2.8 SIS的細(xì)胞毒性研究37-38
• 2.8.1 材料37
• 2.8.2 實(shí)驗(yàn)方法37-38
• 2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法38-39
• 2.10 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-43
• 2.10.1 SIS的大體標(biāo)本觀察39
• 2.10.2 SIS電鏡掃描觀察39
• 2.10.3 SIS的組織學(xué)檢查(HE染色和Hoechst染色)39-40
• 2.10.4 經(jīng)不同濃度PAA氧化脫細(xì)胞處理的SIS單軸力學(xué)拉伸測(cè)定結(jié)果40-41
• 2.10.5 經(jīng)不同濃度PAA處理的SIS的殘余DNA量測(cè)定結(jié)果41-42
• 2.10.6 經(jīng)不同PAA濃度處理的SIS中的生長(zhǎng)因子TGF-β、VEGF的殘余量測(cè)定結(jié)果42-43
• 2.10.7 USCs在SIS上的黏附實(shí)驗(yàn)研究43
• 2.11 討論43-46
• 第三章 初級(jí)組織工程尿道的體外構(gòu)建46-53
• 3.1 初級(jí)組織工程尿道的體外構(gòu)建46-50
• 3.1.1 材料46-47
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法47-50
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-51
• 3.2.1 復(fù)合支架的HE檢測(cè)和Hoechst染色50-51
• 3.2.2 初級(jí)組織工程尿道的Masson三色染色和Hoechst染色51
• 3.3 討論51-53
• 結(jié)語(yǔ)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 附錄59-60
• 在校期間發(fā)表論文情況60-61
• 致謝61-62
• 統(tǒng)計(jì)學(xué)審核證明62

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本文編號(hào)：549415