本文關(guān)鍵詞：PVA復(fù)合LPRF新型創(chuàng)傷敷料的研制及其在皮膚創(chuàng)傷愈合中的作用

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【摘要】：敷料是起到保護(hù)創(chuàng)口、防止感染和促進(jìn)愈合的一種醫(yī)用材料。目前市售的醫(yī)用敷料多是指復(fù)合型敷料,是隨著化學(xué)工程技術(shù)、生物醫(yī)學(xué)工程和組織工程的飛速發(fā)展而出現(xiàn)的。運(yùn)用生物材料本身所具有的新陳代謝、天然的三維結(jié)構(gòu)與工程材料天然良好的機(jī)械性能相結(jié)合而產(chǎn)生的新型創(chuàng)傷敷料。但目前這些敷料有一個(gè)缺點(diǎn):不含生長因子,只能被動(dòng)性的修復(fù)創(chuàng)面,即使含有生長因子,也只限于個(gè)別或幾個(gè)。富血小板纖維蛋白(platelet rich fibrin,PRF)是第二代血小板濃縮產(chǎn)品,已有大量基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用證實(shí)其具有促進(jìn)組織修復(fù)的作用,但將其作為創(chuàng)傷敷料還未有相關(guān)報(bào)道。我們已將PRF應(yīng)用于多種組織再生領(lǐng)域,并且獲得一項(xiàng)關(guān)于PRF的國家實(shí)用新型專利,所以我們打算研制一種含有PRF的新型創(chuàng)傷敷料。聚乙烯醇(Poly vinyl alcohol,PVA)是一種親水的高分子聚合物,具有良好的理化性能和生物相容性,廣泛的應(yīng)用于生物醫(yī)藥、食品工業(yè)。其顯著性的特點(diǎn)是制備簡(jiǎn)單,只需冷凍復(fù)融即可。所以希望研究能否將PRF和PVA兩者進(jìn)行結(jié)合,從而研制出一種新型的創(chuàng)傷敷料。目的探究PRF冷凍干燥后與PVA水凝膠進(jìn)行復(fù)合的可能性,并檢測(cè)其機(jī)械性能、生物相容性、生物降解和所含生長因子的活性以及其在急性全層皮膚缺損中的修復(fù)作用。方法1.制取LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料:無菌抽取兔耳中動(dòng)脈血,高速離心制備PRF,將其冷凍干燥并研磨成顆粒(LPRF),在45℃～50℃下,將0.5g、1g、2g的LPRF放入PVA水凝膠中,磁力攪拌下混合均勻,將混合液以每孔0.5ml或0.25ml放入12孔板或24孔內(nèi),-20℃冷凍24h,室溫下復(fù)融24h,制作LPRF/PVA水凝膠。掃描電鏡觀察新鮮PRF、LPRF、PVA和LPRF/PVA的表面形態(tài)。2.LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料機(jī)械性能測(cè)試:將不同濃度的LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料裁剪成長20 mm,寬5 mm,厚0.2-0.3 mm的啞鈴狀,將其兩端固定在萬能試驗(yàn)機(jī)上進(jìn)行機(jī)械性能測(cè)試。3.LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料生物相容性和生物降解效應(yīng):將LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料按照含有30 mg LPRF/1 ml的量,放入含有血清培養(yǎng)液的無菌離心管中,然后放入37℃的孵箱中浸提24h,離心取上清液與L929細(xì)胞共培養(yǎng),利用MTT法檢測(cè)其細(xì)胞生物相容性。L929直接粘附于LPRF/PVA上,利用光學(xué)顯微鏡、掃描電鏡、熒光顯微鏡觀察L929生長的形態(tài),以此來評(píng)估LPRF/PVA的生物相容性。將LPRF/PVA植入野生型C57小鼠皮下,利用敷料植入前后的重量差測(cè)試其生物降解率。4.LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料體外釋放生長因子和促進(jìn)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn):按照含有30mg LPRF的LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料,放入無血清的培養(yǎng)液中制備敷料浸提液,用ELISA法檢測(cè)其體外釋放血管內(nèi)皮生長因子(vascular endotheial growth factor,VEGF)和血小板衍生生長因子-AB(platelet-derived factors-AB,PDGF-AB)的特點(diǎn),并研究其對(duì)HUVEC細(xì)胞的增殖影響。5.LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料促進(jìn)小鼠皮膚缺損愈合實(shí)驗(yàn):野生型C57小鼠作為急性全層皮膚缺損的實(shí)驗(yàn)對(duì)象,采用固定板固定創(chuàng)緣四周,建立固定板形式的全層缺損模型。將制作的LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料組、空白組、PVA組和LPRF組應(yīng)用于小鼠皮膚創(chuàng)面,并在術(shù)后3、5、7、9、11d采集創(chuàng)面圖像,切取創(chuàng)面組織進(jìn)行組織學(xué)染色(HE、Masson和飽和苦味酸天狼猩紅染色)和免疫組化染色(VEGF,CD31)。結(jié)果1.超微結(jié)構(gòu)觀察:掃描電鏡下顯示:新鮮的PRF為膠原纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),LPRF顆粒呈橢圓形,長軸為118±10.383nm,短軸為81.65±8.591nm,制備的LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料表面結(jié)構(gòu)與單獨(dú)的PVA水凝膠類似,呈連續(xù)的多孔樣結(jié)構(gòu),孔內(nèi)側(cè)壁的小孔在LPRF濃度為1%時(shí)幾乎全部封閉。2.機(jī)械性能測(cè)試結(jié)果:1%LPRF/PVA組的楊氏模量為6.451±1.551x10-2MPa,相比其他組具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),斷裂延伸率為273.049±24.510%與其他組無差別,表明1%LPRF/PVA具有優(yōu)良的機(jī)械性能。3.細(xì)胞相容性和生物降解結(jié)果:利用MTT檢測(cè)法,計(jì)算出L929與不同濃度的LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料浸提液共培養(yǎng)時(shí)的細(xì)胞相對(duì)增殖率大于88%,毒性分級(jí)為0 1級(jí);L929細(xì)胞直接粘附于LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料上,細(xì)胞形態(tài)正常,生長狀況良好;表明LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料具有良好的生物相容性。LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料埋置于小鼠皮下28d后,1%組的降解率在17%~22%之間,符合長期使用。4.體外釋放生長因子和細(xì)胞增殖結(jié)果:利用ELISA法不僅檢測(cè)到了LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料可以正常釋放生長因子,而且其釋放的VEGF的量與LPRF單獨(dú)組無區(qū)別,釋放PDGF-AB的量少于LPRF單獨(dú)釋放的量。LPRF濃度在0.05%~0.75%之間時(shí),LPRF和LPRF/PVA均有明顯的促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用;濃度超過1.5%時(shí),則對(duì)細(xì)胞有明顯的抑制作用。5.小鼠皮膚缺損愈合結(jié)果:急性缺損模型術(shù)后大體觀顯示:創(chuàng)口深達(dá)肌膜層,創(chuàng)面紅潤,無感染出現(xiàn),術(shù)后觀察期內(nèi)沒有固定板的脫落,表明固定板缺損模型建立成功。創(chuàng)面使用各組敷料3、5、7、9、11d后HE染色、Masson染色和飽和苦味酸天狼猩紅染色顯示:1%LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料在愈合初期就出現(xiàn)炎癥細(xì)胞和膠原的沉積,膠原以粗大排列緊密的I型膠原為主,相比其他各組更快的進(jìn)入組織重塑期,從而使創(chuàng)面在術(shù)后11d時(shí)基本完全達(dá)到愈合。LPRF單獨(dú)組在術(shù)后13d才達(dá)到基本愈合�？瞻捉M和PVA組在整個(gè)13d觀察期內(nèi)仍有創(chuàng)口存在。CD31和VEGF免疫組化結(jié)果顯示:7d和9d時(shí),1%組的CD31和VEGF的陽性表達(dá)要高于其他三組,有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);LPRF組的表達(dá)強(qiáng)于PVA組和空白組。11d時(shí),LPRF組陽性表達(dá)強(qiáng)于其他三組,空白組和PVA組的陽性表達(dá)高于1%組的表達(dá)。結(jié)論成功制備出LPRF微粒并將其與PVA水凝膠利用物理結(jié)合的方式復(fù)合在一起,制作成新型的含有多種活性生物因子且具有優(yōu)良機(jī)械性能和生物相容性的創(chuàng)傷敷料即LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料,并通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了其在急性全層皮膚缺損下,能夠促進(jìn)組織的愈合。
【關(guān)鍵詞】：創(chuàng)傷敷料 機(jī)械性能 生物相容性 富血小板纖維蛋白 聚乙烯醇 急性全層皮膚缺損
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-16
• 文獻(xiàn)回顧16-23
• 實(shí)驗(yàn)一 LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料制備23-30
• 1 材料23-24
• 2 方法24-25
• 3 結(jié)果25-28
• 4 討論28-29
• 5 結(jié)論29-30
• 實(shí)驗(yàn)二 LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料性能檢測(cè)30-43
• 1 材料30-31
• 2 方法31-34
• 3 結(jié)果34-41
• 4 討論41-42
• 5 結(jié)論42-43
• 實(shí)驗(yàn)三 LPRF/PVA創(chuàng)傷敷料促進(jìn)小鼠急性皮膚全層缺損愈合的實(shí)驗(yàn)研究43-60
• 1 材料43-44
• 2 方法44-45
• 3 結(jié)果45-57
• 4 討論57-58
• 5 結(jié)論58-59
• 小結(jié)59-60
• 參考文獻(xiàn)60-69
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果69-70
• 致謝70

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本文編號(hào)：536113