發(fā)布時間：2017-07-07 22:15

  本文關(guān)鍵詞：硫酸軟骨素在軟骨組織工程中的應(yīng)用研究

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【摘要】：背景： 關(guān)節(jié)軟骨缺損按損傷程度可分為三種類型：部分軟骨缺損、全層軟骨缺損和骨軟骨缺損。目前臨床上常用的治療方法主要有微骨折術(shù)、自體軟骨細(xì)胞移植、人工關(guān)節(jié)置換等。組織工程是一門新興的綜合學(xué)科,涵蓋了生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)和工程學(xué)等多個學(xué)科領(lǐng)域,在治療軟骨缺損方面有著廣闊的應(yīng)用前景。硫酸軟骨素是一種天然酸性氨基多糖,是軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分之一,具有多種重要生物活性。本研究基于硫酸軟骨素設(shè)計了兩種支架材料用于關(guān)節(jié)軟骨缺損的修復(fù),探討硫酸軟骨素在軟骨組織工程的新應(yīng)用。本研究分為兩個部分：(1)硫酸軟骨素復(fù)合蠶絲支架用于修復(fù)全層軟骨缺損的研究；(2)硫酸軟骨素復(fù)合多巴胺用于軟骨表面改性的研究。 第一部分硫酸軟骨素復(fù)合蠶絲支架修復(fù)全層軟骨缺損 目的：探討蠶絲-硫酸軟骨素支架在修復(fù)全層軟骨缺損中的作用效果,為支架進入臨床應(yīng)用做前期基礎(chǔ)研究。 方法：構(gòu)建蠶絲支架和蠶絲-硫酸軟骨素支架,并對支架的微觀結(jié)構(gòu)、硫酸軟骨素含量和力學(xué)性能進行表征,檢測支架對人來源的軟骨細(xì)胞粘附、增殖和遷移的影響,通過實時RT-PCR測定支架的抗炎活性。利用新西蘭兔制造膝關(guān)節(jié)軟骨全層缺損模型,分別植入蠶絲支架和蠶絲-硫酸軟骨素支架,術(shù)后6周和12周收樣本,對樣本進行大體觀察和評分,以及組織學(xué)觀察和評分。 結(jié)果：蠶絲-硫酸軟骨素支架較蠶絲支架力學(xué)性能更好,促遷移能力更強,抗炎活性更高。植入蠶絲-硫酸軟骨素支架的關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)效果優(yōu)于蠶絲支架組和空白對照組。 結(jié)論：蠶絲-硫酸軟骨素支架能很好地修復(fù)全層軟骨缺損,是有臨床應(yīng)用前景的軟骨組織工程支架材料。 第二部分硫酸軟骨素復(fù)合多巴胺用于軟骨表面改性 目的：探討硫酸軟骨素-多巴胺復(fù)合物形成生物涂層的能力及該涂層的生理功能,為硫酸軟骨素-多巴胺生物涂層應(yīng)用于部分軟骨缺損的修復(fù)做前期研究。 方法：合成硫酸軟骨素-多巴胺復(fù)合物,并利用1H-NMR圖譜對其結(jié)構(gòu)進行表征。利用多巴胺的氧化自聚合性質(zhì),在軟骨表面制備了硫酸軟骨素-多巴胺生物涂層,對軟骨進行表面改性,考察了該涂層對軟骨表面形貌的影響,測定了其對人來源的軟骨細(xì)胞的毒性大小,并檢測了其對細(xì)胞增殖和粘附的影響。 結(jié)果：硫酸軟骨素-多巴胺生物涂層不改變軟骨的表面形貌和三維結(jié)構(gòu),對軟骨細(xì)胞無毒性,能促進軟骨細(xì)胞增殖,有效提高外源軟骨細(xì)胞在軟骨表面的粘附率。 結(jié)論：硫酸軟骨素-多巴胺涂層有優(yōu)良的細(xì)胞相容性和生物活性,可用于軟骨組織工程,為軟骨組織工程中提高新生組織與周邊原生組織的整合性提供了新的方法和思路。
【關(guān)鍵詞】：軟骨組織工程 軟骨缺損修復(fù) 硫酸軟骨素 蠶絲 多巴胺
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-7
• ABSTRACT7-13
• 引言13-16
• 1 第一部分 硫酸軟骨素復(fù)合蠶絲支架修復(fù)全層軟骨缺損16-33
• 1.1 實驗材料16-17
• 1.1.1 材料和試劑16
• 1.1.2 實驗儀器及材料16
• 1.1.3 相關(guān)溶液的配制16-17
• 1.1.4 實驗動物17
• 1.2 實驗方法17-23
• 1.2.1 支架的制備和觀察17-18
• 1.2.2 硫酸軟骨素的定量和釋放18
• 1.2.3 支架的力學(xué)測試18-19
• 1.2.4 人軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)19
• 1.2.5 支架的生物相容性研究19-20
• 1.2.6 細(xì)胞遷移測試20
• 1.2.7 蠶絲-硫酸軟骨素支架的體外抗炎活性20-21
• 1.2.8 關(guān)節(jié)軟骨全層缺損的動物模型21
• 1.2.9 關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)的大體評估21-22
• 1.2.10 組織學(xué)染色22-23
• 1.2.11 統(tǒng)計學(xué)分析23
• 1.3 實驗結(jié)果23-30
• 1.3.1 支架的形貌分析23-24
• 1.3.2 硫酸軟骨素的定量24
• 1.3.3 硫酸軟骨素的釋放24-25
• 1.3.4 支架的力學(xué)測試25
• 1.3.5 軟骨細(xì)胞在支架上的粘附25-26
• 1.3.6 軟骨細(xì)胞在支架上的增殖26
• 1.3.7 蠶絲-硫酸軟骨素支架對軟骨細(xì)胞遷移的影響26-27
• 1.3.8 蠶絲-硫酸軟骨素支架的體外抗炎活性27-28
• 1.3.9 全層軟骨缺損修復(fù)的大體觀察28
• 1.3.10 全層軟骨缺損修復(fù)的大體評估28-29
• 1.3.11 全層軟骨缺損修復(fù)的組織學(xué)染色觀察29-30
• 1.4 討論30-33
• 2 第二部分 硫酸軟骨素復(fù)合多巴胺用于軟骨表面改性33-42
• 2.1 實驗材料33
• 2.1.1 材料和試劑33
• 2.1.2 實驗儀器及材料33
• 2.1.3 相關(guān)溶液的配制33
• 2.1.4 實驗動物33
• 2.2 實驗方法33-36
• 2.2.1 CS-D的制備33-34
• 2.2.2 CS-D的結(jié)構(gòu)表征34
• 2.2.3 軟骨切片的制備34
• 2.2.4 軟骨表CS-D涂層的制備34
• 2.2.5 CS-D涂層的形貌表征34-35
• 2.2.6 人軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)(同第一部分)35
• 2.2.7 CS-D涂層的細(xì)胞毒性測定35
• 2.2.8 CS-D涂層的細(xì)胞增殖測定35
• 2.2.9 CS-D涂層的細(xì)胞粘附測定35-36
• 2.2.10 統(tǒng)計學(xué)分析36
• 2.3 實驗結(jié)果36-40
• 2.3.1 CS-D的制備和表征36-37
• 2.3.2 CS-D涂層的表面形貌分析37-38
• 2.3.3 CS-D涂層的細(xì)胞毒性38-39
• 2.3.4 CS-D涂層對軟骨細(xì)胞增殖和粘附的影響39-40
• 2.4 討論40-42
• 3 第三部分結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 綜述48-62
• 參考文獻(xiàn)56-62
• 作者簡歷及在學(xué)期間所取得的科研成果62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：532037