本文關(guān)鍵詞：基于可控表面的納米電紡絲技術(shù)的軟骨細胞表型及其向纖維軟骨分化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：對于損傷的半月板，部分切除、縫合或重新固定在膝關(guān)節(jié)內(nèi)部已越來越多的被用于防治半月板撕裂[1-4]。行半月板部分切除術(shù)已常見于臨床治療手段，但這種方法卻能導(dǎo)致明顯的功能缺陷，主要表現(xiàn)在膝關(guān)節(jié)屈伸肌肌力下降[3,5]。膝關(guān)節(jié)正常的穩(wěn)定性、關(guān)節(jié)部位的承載力量的正常分布都明顯的依賴于人體大腿的肌肉力量。[3,5,6]. Hurley通過實驗證實行半月板部分切除術(shù)后的患者在大腿肌肉力量降低的情況下，早期往往伴隨并發(fā)骨性關(guān)節(jié)炎[7,8]。而半月板縫合術(shù)有效的保護了關(guān)節(jié)軟骨，從而大體上預(yù)防了早期發(fā)展的骨退行性變化[9]。 大腿肌肉力量的降低可以通過誘發(fā)半月板本體感受器的機械性損傷伴其縫合引起或僅僅是部分半月板切除后引起其力量降低[1,10-13]。通過研究半月板切除術(shù)后患者的大腿肌肉表面的肌電圖已證實上述觀點[14]。運動單位的聚集是由膝關(guān)節(jié)的本體感覺傳入纖維包括半月板受體輸入脊髓和脊椎上的中心的活動引起。這種多通道相互協(xié)調(diào)的概念由Glatthorn等人證實[15]，他指出對于半月板部分切除術(shù)后的患者，股四頭肌運動單位的數(shù)量和聚集頻率都發(fā)生了紊亂。半月板損傷后膝關(guān)節(jié)的疼痛會干擾關(guān)節(jié)部位的穩(wěn)定性，使得患者在行下肢手術(shù)前無法承重。這些因素同樣也限制了患者的體力活動，最后，導(dǎo)致了肌肉的快速萎縮，與之相伴的是肌肉力量的降低[5]。膝關(guān)節(jié)術(shù)后的功能完全恢復(fù)需要持續(xù)幾周，尤其是對于行半月板縫合術(shù)或重新固定的患者。這種對于活動的限制也使得大腿肌肉力量有所降低。 行半月板切除術(shù)后的患者經(jīng)常能觀察到膝關(guān)節(jié)的不穩(wěn)定性[12]。激活膝伸肌和屈肌的共同活動的正常模式出現(xiàn)紊亂是引起這一現(xiàn)象的常見原因[17]。保持膝關(guān)節(jié)的穩(wěn)定性顯著影響著整個機體的穩(wěn)定性、整體運動的相互協(xié)調(diào)和大腿肌肉力量的力量和耐力。通過研究分析相同參數(shù)下的膝伸肌和膝屈肌在極限負荷下（這是典型的許多患者的活動）的力量關(guān)系證實了這一現(xiàn)象[18-21]。 Burkset[22]和Schimmer[23]等人通過研究描述了在行半月板切除術(shù)后的患者術(shù)后快速恢復(fù)正常膝關(guān)節(jié)功能的一個必要的措施就是引入監(jiān)督康復(fù)，從而術(shù)后康復(fù)[12,24,25]。另一方面，其他研究人員指出了在早期康復(fù)引入這項措施的重要性[4,15]。鮮為人知的是，患者行半月板縫合術(shù)或重新固定術(shù)后出現(xiàn)的可能相關(guān)性的功能降低與監(jiān)督康復(fù)之間的相互聯(lián)系[4]。對于膝關(guān)節(jié)損傷行手術(shù)治療的患者，等速肌力檢查的結(jié)果并不總是與功能評估的分?jǐn)?shù)相關(guān)（單側(cè)腿抬高測試，單側(cè)腿跳躍測試）[3,26,27]。 本研究的目的是通過對行膝關(guān)節(jié)半月板切除術(shù)或半月板縫合術(shù)的術(shù)后患者進行1年隨訪，對康復(fù)持續(xù)6個月后的半月板撕裂的膝關(guān)節(jié)功能進行功能評功。通過分析單側(cè)腿跳躍實驗和單側(cè)腿抬高試驗的臨床檢測結(jié)果來確定所觀察的膝關(guān)節(jié)的功能效率。通過臨床研究的結(jié)果建立一種評價治療半月板損傷術(shù)后康復(fù)效果的客觀的方法。我們假設(shè)半月板縫合術(shù)能產(chǎn)生更好的術(shù)后恢復(fù)效果。 目的：對于內(nèi)側(cè)半月板損傷兩種手術(shù)方式治療后的患者進行1年隨訪,采用同樣的康復(fù)監(jiān)督措施,比較二者治療方式后患者的功能恢復(fù)情況。 方法：選擇30個病人,經(jīng)過KOSS分?jǐn)?shù)評價為良好,分成兩組,分別為半月板切除術(shù)與半月板縫合術(shù)兩組.通過臨床研究膝關(guān)節(jié)采用單側(cè)腿跳一抬高試驗評價膝關(guān)節(jié)功能。檢查后的結(jié)果與健康的志愿者兩者相互比較。通過臨床檢測的結(jié)果建立評價兩種治療方式比較的客觀的方法，比較二者治療方式后患者的功能恢復(fù)情況。 結(jié)果：分別比較半月板切除術(shù)后與健康的志愿者、半月板縫補術(shù)后與健康的志愿者之間的臨床功能檢測結(jié)果，功能試驗檢測顯示患者在半月板切除術(shù)后與正常人體之間有著明顯區(qū)別（P≤0.01），半月板修補術(shù)后的患者功能檢測與半月板切除術(shù)后的患者也不同（P≤0.05）。 結(jié)論：結(jié)果顯示半月板切除術(shù)后的患者功能恢復(fù)相比半月板修補更差，這意味著術(shù)后的康復(fù)方法仍需改進。 軟骨細胞作為軟骨組織在軟骨基質(zhì)中唯一存在的特定的細胞種類，在軟骨組織再生與代謝方面起到了重要作用。但是由于軟骨組織中缺少血管和神經(jīng)系統(tǒng)，軟骨在自身修復(fù)方面存在一定的局限性。針對軟骨細胞的重要性和局限性,目前新興了一種新的概念-生物組織工程學(xué)。它將工程學(xué)、生命科學(xué)和材料學(xué)相結(jié)合，構(gòu)建人體組織或器官的功能替代物,從而在體外更精確的模擬生物體內(nèi)環(huán)境并研究其功能。生物組織工程學(xué)對于臨床醫(yī)學(xué)方面有重要意義，其所構(gòu)建的生物支架材料可以為特定的細胞模擬體內(nèi)三維結(jié)構(gòu)支撐，不僅為組織再生提供模板，還可以更好的研究各種影響因子對于組織再生和控制組織結(jié)構(gòu)方面的影響。組織工程利用體外構(gòu)建帶有特定功能的軟骨組織再移植入體內(nèi)的治療方法，為軟骨修復(fù)治療提供了可能。由于軟骨細胞在普通的二維培養(yǎng)模式下容易失去表型而向纖維細胞表型分化，失去了軟骨的特定功能，因此在體外保持軟骨的表型的研究對于臨床應(yīng)用有十分重要的意義。半月板在膝關(guān)節(jié)內(nèi)起著重要作用，維持膝關(guān)節(jié)的穩(wěn)定性，均衡傳導(dǎo)負荷，吸收剪切應(yīng)力，潤滑關(guān)節(jié)并為其提供營養(yǎng)。半月板為纖維軟骨結(jié)構(gòu),由軟骨細胞和膠原纖維基質(zhì)構(gòu)成，體內(nèi)纖維軟骨的細胞外基質(zhì)多成平行排列。體外構(gòu)建具有功能的纖維軟骨具有重要的臨床研究意義。 目前在生物組織工程的應(yīng)用方面，納米材料正成為一種新的研究趨勢，納米技術(shù)的應(yīng)用也更加被人們所重視。電紡絲在制備納米纖維材料方面有著特定優(yōu)勢，相比其他技術(shù)，它更加簡便有效。它是在強電場的環(huán)境下將聚合物溶液形成噴流并進行紡絲加工的技術(shù)。這門技術(shù)所需的制作設(shè)備簡易，而且也能更高效的控制紡絲的形狀和結(jié)構(gòu)從而制備特定物理結(jié)構(gòu)和功能的紡絲制品。由電紡絲技術(shù)制備的紡絲纖維表面積大，孔隙率高，，纖維纖度細，這些特點可為細胞的生長提供不同結(jié)構(gòu)的多孔支架，利于特定細胞的生長和增殖。因此電紡絲技術(shù)已越來越多的被應(yīng)用于納米技術(shù)和納米材料的制備，并在生物組織工程領(lǐng)域起著很重要的作用。 目的：建立一種簡易可控的不同電紡絲表面的平臺用于軟骨細胞的體外培養(yǎng)，并很好的維持軟骨細胞的表型，利用平行的納米電紡絲構(gòu)建了纖維軟骨細胞外基質(zhì)的模型培養(yǎng)軟骨細胞并讓其向纖維軟骨分化。 方法： 1.大鼠原代軟骨細胞的提取 2.制作聚乳酸乙醇酸(Poly-(lactic-co-glycolic) acid, PLGA)納米紡絲:電壓：7.5kV流體速度：8μ l/min。 3.利用了不同表面結(jié)構(gòu)（平行和垂直方向）的納米電紡絲來研究軟骨細胞在紡絲上的形態(tài)，行為和功能。平面的玻璃表面作為對照組，軟骨細胞在平面玻璃，平行電紡絲，垂直電紡絲3種表面生長7天后，通過免疫熒光染色表征Ⅰ型膠原，Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達，同時利用實時定量PCR在基因水平上鑒定以上3種基因的表達。 結(jié)果： 1.電鏡鑒定PLGA納米電紡絲的直徑為：200納米。 2.軟骨細胞在平的玻璃表面生長呈現(xiàn)多角形，在平行電紡絲上細胞生長在紡絲之間，在垂直電紡絲上細胞可長在表面和紡絲之間。 3.免疫熒光染色：軟骨細胞在不同的表面生長7天后，在蛋白水平上Ⅰ型膠原，Ⅱ型膠原和蛋白多糖存在差異，其中，在平行納米電紡絲表面，軟骨細胞3種蛋白的表達全部上調(diào)，而垂直的納米電紡絲表面只有Ⅱ型膠原表達上調(diào)。 4.基因分析：利用實時定量PCR分析Ⅰ型膠原，Ⅱ型膠原和蛋白多糖3種基因的表達差異，以平面玻璃的表面實驗組作對照組，進行相對定量。其中，在平行納米電紡絲表面，軟骨細胞Ⅰ型膠原，Ⅱ型膠原和蛋白多糖3種基因的表達顯著上調(diào)。 結(jié)論： 軟骨細胞在平行的納米電紡絲表面上能提高Ⅱ型膠原與蛋白多糖的表達，同時也能顯著提高Ⅰ型膠原的表達，使其在納米電紡絲表面上更能維持軟骨細胞表型，并更易于向纖維軟骨分化。而在垂直方向的納米電紡絲表面并沒有對蛋白多糖的表達有促進作用。該研究系統(tǒng)可以為組織工程和組織移植等治療提供有效的工具和理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：半月板切除術(shù) 半月板縫合 單側(cè)腿抬高測試 單側(cè)腿跳躍測試 康復(fù)督導(dǎo) 軟骨細胞 納米 電紡絲 纖維軟骨 平行
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 論文一 縫合修補術(shù)與切除術(shù)對于半月板損傷修復(fù)后臨床功能評價方面的比較8-21
• 摘要8-10
• Abstract10-13
• （一） 前言13-14
• （二） 材料和方法14-16
• 1. 實驗設(shè)計14-15
• 1.1 1年隨訪臨床半月板損傷修復(fù)患者14
• 1.2 選定受試者的范圍14
• 1.3 指導(dǎo)監(jiān)督術(shù)后康復(fù)鍛煉14-15
• 2. 實驗方法15
• 3. 統(tǒng)計學(xué)方法15-16
• （三） 結(jié)果16-17
• （四） 討論17
• （五） 結(jié)論17-18
• （六） 參考文獻18-21
• 論文二 基于可控表面的納米電紡絲技術(shù)的軟骨細胞表型及其向纖維軟骨分化的研究21-49
• 摘要21-24
• Abstract24-27
• （一） 前言27-29
• （二） 材料和方法29-36
• 1. 材料及試劑29-30
• 1.1 主要試劑29-30
• 1.2 標(biāo)本來源及用液配制30
• 1.3 主要器材30
• 2. 實驗方法30-35
• 2.1 SD 大鼠關(guān)節(jié)軟骨原代細胞的提取30-31
• 2.2 PLGA 電紡絲制作31-32
• 2.3 實驗組設(shè)置32
• 2.4 免疫熒光技術(shù)檢測32-33
• 2.5 實時熒光定量 PCR33-35
• 3. 統(tǒng)計學(xué)方法35-36
• （三） 結(jié)果36-44
• 1. SD 大鼠原代軟骨細胞培養(yǎng)與鑒定36
• 2. PLGA 紡絲方法與 PLGA 納米電紡絲結(jié)構(gòu)鑒定36-37
• 3. 軟骨細胞在三種不同的表面生長的形態(tài)觀察與增殖37-40
• 4. 三種不同表面對于軟骨細胞蛋白表達的影響40-43
• 5. 三種不同表面對于軟骨細胞基因表達的影響43-44
• （四） 討論44-46
• （五） 結(jié)論46-47
• （六） 參考文獻47-49
• 綜述49-58
• 參考文獻56-58
• 致謝58-59

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 諸乃彤;張毅;;靜電紡絲技術(shù)在生物組織工程上的應(yīng)用[J];天津紡織科技;2009年03期

2 劉競龍,余斌,高成杰;骨組織工程材料修復(fù)骨缺損:大鼠成骨細胞與聚乳酸和聚乙醇酸共聚合物支架聯(lián)合培養(yǎng)觀察[J];中國臨床康復(fù);2002年16期

  本文關(guān)鍵詞：基于可控表面的納米電紡絲技術(shù)的軟骨細胞表型及其向纖維軟骨分化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：473502