本文關鍵詞：P-15新型生物材料在治療椎體壓縮骨折中應用的基礎實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：檢測P-15肽對軟骨細胞形態(tài)，堿性磷酸酶水平，軟骨細胞基因的改變以及對蛋白表達的外源性影響。此外，利用在小鼠體內(nèi)實驗模型來模仿骨折骨痂形成和評估的P-15肽對骨髓間充質(zhì)干細胞吸引、軟骨細胞分化、以及成骨和軟骨骨化的影響，以期望為椎體成形術微創(chuàng)治療椎體壓縮性骨折尋找新的生物填充材料。 方法：體外實驗：我們使用小鼠的MSC(骨髓間充質(zhì)干細胞系)，使用軟骨培養(yǎng)液，，條件在37oC、5%CO2環(huán)境中進行培養(yǎng)，在本實驗中使用的是MSC培養(yǎng)出來的6-14代細胞。首先準備好2種不同朔料培養(yǎng)盤，一種上面鋪有P-15肽物質(zhì)，另一種培養(yǎng)盤沒有經(jīng)過任何處理作為對照組。然后取培養(yǎng)皿中的細胞（8X10~4）分別接種不同的培養(yǎng)盤中。每隔2天更換一次培養(yǎng)液，然后分別提取3、6、9、12天的細胞作為分析對象。我們利用這些提取的細胞分別進行了軟骨微細胞團的培養(yǎng)和染色，免疫組織化學分析，同時進行圖像的采集和分析，蛋白的定量和印跡分析。體內(nèi)實驗：P-15和rhBMP-2按照一定的比例結(jié)合起來被用作刺激骨骼生長的一種藥品,實驗用的動物是8-12周的雄性小白鼠，首先使其在新的環(huán)境中適應2天，以便調(diào)整其身體機能，保證實驗的準確性。然后我們給小白鼠進行體內(nèi)注射皮丘實驗，每個小皮丘的基質(zhì)膠的總量是250ul，具體分為2組，1：基質(zhì)膠+rhBMP-2（左側(cè)），2：基質(zhì)膠+rhBMP-2+P-15（右側(cè)），并且同時注入一只小鼠體內(nèi)，并分別在注射后12和20天通過二氧化碳窒息法猝死小鼠,取出小鼠體內(nèi)形成的微型顆粒狀物質(zhì)，及小皮丘，我們對該微粒進行微型CT分析，并且完成相應的組織學實驗研究（切片、染色及圖像處理分析）。 結(jié)果：體外實驗，組織切片的結(jié)果：P-15肽促進軟骨細胞增殖，促進軟骨細胞分化。體內(nèi)實驗，小鼠模型中P-15+rhBMP這種復合物相比較單獨加入rhBMP可以增加骨髓間充質(zhì)干細胞（MSC）吸附和增殖、增加顆粒骨化和軟骨沉積、同時增加體內(nèi)關鍵蛋白表達。 結(jié)論：P15可以增強骨細胞粘附、促進細胞分化、遷移及提高細胞存活率，重要的是可以促進骨再生，從而p-15可作為新型填充材料應用于椎體壓縮性骨折治療中。
【關鍵詞】：P15 骨質(zhì)疏松 壓縮性骨折
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R683.2;R318.08
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-16
• 1.1 椎體壓縮性骨折的原因與治療11
• 1.1.1 椎體壓縮性骨折的原因11
• 1.1.2 椎體壓縮性骨折的治療11
• 1.2 椎體成形術的分類及應用11-13
• 1.2.1 椎體成形術分類11-12
• 1.2.2 椎體成形術在骨質(zhì)疏松性椎體骨折中的應用12
• 1.2.3 椎體成形術在椎體腫瘤中的應用12-13
• 1.2.4 椎體成形術的并發(fā)癥13
• 1.3 病人的選擇13-14
• 1.4 實驗的研究背景14-16
• 第2章 資料與方法16-20
• 2.1 體外實驗16-18
• 2.1.1 細胞培養(yǎng)16
• 2.1.2 軟骨微細胞團培養(yǎng)和染色16-17
• 2.1.3 免疫組化分析17
• 2.1.4 圖像采集和分析17
• 2.1.5 蛋白提取和 Western Blot（蛋白質(zhì)印跡）分析17-18
• 2.2 體內(nèi)實驗18-19
• 2.2.1 生物基質(zhì)膠分析18-19
• 2.2.2 微型 CT 分析19
• 2.2.3 組織學分析19
• 2.3 統(tǒng)計方法19-20
• 第3章 結(jié)果20-23
• 3.1 體外實驗結(jié)果20-21
• 3.1.1 P-15 肽促進軟骨細胞增殖20
• 3.1.2 P-15 肽促進軟骨細胞分化20
• 3.1.3 P-15 誘導 a5β1 整合并激活磷酸化 FAK 信號通路20-21
• 3.2 體內(nèi)的實驗結(jié)果21-23
• 3.2.1 小鼠模型中 P-15+ rhBMP 這種復合物可以增加骨髓間充質(zhì)干細胞（MSC）吸附和增殖21-22
• 3.2.2 P-15+ rhBMP 復合物增加顆粒骨化和軟骨沉積22
• 3.2.3 P15 + rhBMP 復合物增加體內(nèi)關鍵的蛋白表達22-23
• 第4章 討論23-26
• 結(jié)論26-27
• 參考文獻27-32
• 附圖32-37
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果37-39
• 致謝39

【參考文獻】

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1 劉康,季暉,李紹平,于冰,李耐三;三種大鼠骨質(zhì)疏松模型的比較研究[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;1998年04期

  本文關鍵詞：P-15新型生物材料在治療椎體壓縮骨折中應用的基礎實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：455192