本文關鍵詞：共培養(yǎng)技術用于體外構建組織工程軟骨的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：一、人骨髓間充質干細胞與人軟骨細胞的分離培養(yǎng) 目的：探索人骨髓間充質干細胞（human bone marrow mesenchymal stem cells，hBMSCs）與人軟骨細胞（human Articular Chontrocytes，hACs）的體外分離及培養(yǎng)過程，并對其進行鑒定；嘗試利用轉化因子β1（Transforming growth factorβ1，TGF-β1）誘導hBMSCs向軟骨細胞分化。 方法：取5～8歲兒童四肢長骨骨折需髓內釘固定者，抽吸其鉆孔后流出的骨髓，通過分離、離心獲得細胞，采用低糖DMEM培養(yǎng)基進行體外培養(yǎng)，采取流式細胞儀對培養(yǎng)的細胞進行鑒定；使用倒置顯微鏡觀測細胞形態(tài)及生長狀況，繪制hBMSCs生長曲線。利用TGF-β1誘導hBMSCs向軟骨細胞分化。對誘導后的細胞進行阿利新藍染色、蕃紅花-亮綠染色檢測細胞蛋白聚糖Aggrecan，GAG），免疫組織化學染色檢測II型膠原。取多指（趾）患兒切除下來的關節(jié)軟骨，分離、消化獲得軟骨細胞，，鑒定同hBMSCs誘導軟骨細胞。 結果：hBMSCs呈現(xiàn)貼壁生長，約2ml骨髓中獲得的hBMSCs經(jīng)10天左右可長滿六孔板的一孔。傳代后，其第一代～第五代生長旺盛，培養(yǎng)至二十代漸出現(xiàn)凋亡。第三代hBMSCs經(jīng)流式細胞儀檢測CD34、CD45表達陰性，CD29表達陽性。利用TGF-β1誘導后的hBMSCs其阿利新藍、蕃紅花-亮綠及免疫組化II型膠原染色表達陽性。 多指（趾）軟骨細胞2周長滿六孔板的一孔。鑒定結果同hBMSCs誘導軟骨細胞。 結論：1、在體外成功分離、培養(yǎng)了hBMSCs和hACs。 2、hBMSCs可來源于5～8歲兒童四肢長骨骨髓。 3、成功利用轉化因子β1誘導hBMSCs分化成軟骨細胞。 二、人骨髓間充質干細胞與人軟骨細胞共混培養(yǎng)體外構建組織工程軟骨 目的：研究hACs與hBMSCs直接接觸共培養(yǎng)的最佳比例；比較混合培養(yǎng)與TGF-β1誘導hBMSCs體外構建組織工程軟骨的效果。 方法：取上述分離培養(yǎng)后第三代hBMSCs和第三代hACs以2：1、1：1、1：2的比例共培養(yǎng)并接種于絲素蛋白支架（實驗組A、B、C）。同時建立誘導劑誘導第三代hBMSCs向軟骨細胞分化并接種于絲素支架的對照組D；建立單純第三代hACs接種于絲素支架的對照組E。保持各組細胞總數(shù)一致。將細胞-支架復合物進行體外培養(yǎng)3周，采用倒置顯微鏡、大體形態(tài)、組織學HE染色、II型膠原染色、阿利新藍比色法測GAG含量及Hoechst33258熒光法行DNA定量分析進行觀察。 結果：各組細胞在絲素蛋白三維支架上均生長良好；各組細胞支架復合物外觀大小無明顯差異。A組（hBMSCs：hACs=2：1）與D組（TGF-β1誘導組）形成的細胞支架復合物彈性、光澤較差，組織學染色見細胞增殖少，細胞外基質分泌水平較低，GAG與DNA定量分析結果低于其他三組。C組（hBMSCs：hACs=1：2）構建的細胞支架復合物具有最佳的彈性與光澤，組織學染色見細胞支架結合緊密，細胞增殖較多，胞外基質豐富，GAG與DNA定量分析結果最高。B組（hBMSCs：hACs=1：1）與E組（單純hACs組）體外構建的組織工程軟骨質量相當。 結論：1、hBMSCs與hACs之間的相互作用有利于軟骨細胞外基質的產(chǎn)生，比例為2：1時即可獲得與TGF-β1誘導hBMSCs相當?shù)某绍浌切?2、hBMSCs與hACs直接接觸共培養(yǎng)比例為1：2時具有最佳的成軟骨效應。
【關鍵詞】：骨髓間充質干細胞 軟骨細胞 誘導 組織工程軟骨 共培養(yǎng)
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R318.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-12
• 材料和儀器準備12-14
• 第一部分 人骨髓間充質干細胞與人軟骨細胞的分離培養(yǎng)14-22
• 一、實驗方法14-16
• 二、實驗結果16-17
• 三、討論17-21
• 四、結論21-22
• 第二部分 人骨髓間充質干細胞與人軟骨細胞共混培養(yǎng)體外構建組織工程軟骨22-34
• 一、實驗方法22-25
• 二、實驗結果25-28
• 三、討論28-32
• 四、結論32-34
• 附圖34-41
• 參考文獻41-48
• 綜述48-61
• 參考文獻55-61
• 攻讀學位期間公開發(fā)表的論文61-62
• 中英文縮寫詞表62-63
• 致謝63-64

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃粵;戴麗冰;鐘曉e

本文編號：427985