本文關(guān)鍵詞：氨基熒光探針檢測(cè)用于制作人工心臟瓣膜的牛心包交聯(lián)程度的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的 生物材料廣泛應(yīng)用于心血管外科領(lǐng)域,如：應(yīng)用生物材料豬主動(dòng)脈瓣、牛心包、牛頸靜脈等制作心臟生物瓣膜,帶瓣血管、補(bǔ)片等,應(yīng)用前都經(jīng)過(guò)交聯(lián)改性處理。交聯(lián)改性處理的關(guān)鍵步驟是使生物材料內(nèi)部蛋白質(zhì)分子的氨基或羧基末端之間發(fā)生交聯(lián)反應(yīng),交聯(lián)反應(yīng)的程度直接決定了生物材料處理的效果,因此,交聯(lián)度檢測(cè)成為判斷組織品質(zhì)的重要檢測(cè)方法之一。目前只有間接檢測(cè)方法,且現(xiàn)行方法陳舊,不能準(zhǔn)確有效的說(shuō)明交聯(lián)反應(yīng)程度,本實(shí)驗(yàn)利用羧基熒光素琥珀酰亞胺酯能與氨基基團(tuán)發(fā)生特異性不可逆結(jié)合,且在波長(zhǎng)為488nm的激發(fā)光下發(fā)出綠色熒光這一特性,建立一種檢測(cè)生物瓣膜交聯(lián)效果的新技術(shù)—氨基熒光探針?lè)?它能量化未經(jīng)交聯(lián)處理的氨基數(shù)量,從而反應(yīng)生物瓣膜交聯(lián)程度。 研究方法 以0.5%濃度戊二醛交聯(lián)的經(jīng)脫細(xì)胞處理的牛心包為研究對(duì)象,按其與戊二醛作用時(shí)間不同分組,未經(jīng)戊二醛處理的牛心包為對(duì)照組(A組),0.5%戊二醛處理組分為：10分鐘組(B組),30分鐘組(C組),6小時(shí)組(D組)。各組反應(yīng)后洗脫戊二醛,將牛心包作快速冰凍切片,在避光條件下與羧基熒光素琥珀酰亞胺酯反應(yīng)2小時(shí)后于熒光顯微鏡下觀察各組熒光強(qiáng)度并拍照,用特殊的熒光分析軟件分析每張圖片的熒光強(qiáng)度,作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,比較各組平均熒光強(qiáng)度差異。同時(shí)對(duì)各組牛心包組織提蛋白行聚丙烯酰胺凝膠電泳,比較新方法與傳統(tǒng)方法檢測(cè)牛心包交聯(lián)程度的差異。 結(jié)果 熒光顯微鏡下可見(jiàn)隨交聯(lián)時(shí)間增加綠色熒光越弱,熒光強(qiáng)度對(duì)照組(A組)10分鐘組(B組)30分鐘組(C組)6小時(shí)組(D組),差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。傳統(tǒng)方法聚丙烯酰胺凝膠電泳從A組到D組可提取蛋白越來(lái)越少。 結(jié)論 羧基熒光素琥珀酰亞胺酯是一種有效的熒光試劑,可以與氨基基團(tuán)特性性結(jié)合行成一種穩(wěn)定的連接,并在488nm波長(zhǎng)光激發(fā)下發(fā)出綠色熒光,與傳統(tǒng)檢測(cè)生物瓣膜交聯(lián)度方法相比,更為直觀、靈敏,且能反應(yīng)瓣膜組織任何部位、任何層厚的的交聯(lián)效果,同時(shí)這一方法可能用來(lái)揭示其它交聯(lián)劑反應(yīng)的原理。
【關(guān)鍵詞】：羧基熒光素琥珀酰亞胺酯 牛心包 人造生物瓣膜 交聯(lián)度
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R654.2;R318.08
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-14
• 一、材料與方法14-19
• 1. 材料14-15
• 2. 方法15-19
• 二、結(jié)果19-22
• 1. 熒光圖片分析19
• 2. 平均熒光強(qiáng)度數(shù)據(jù)分析19-21
• 3.傳統(tǒng)方法聚丙稀酸胺凝膠電泳結(jié)果分析21-22
• 三、討論22-35
• 1. 人工心臟瓣膜的分類和發(fā)展22-23
• 2. 交聯(lián)材料牛心包的選擇及其特性23-24
• 3. 脫細(xì)胞方法的選擇24-26
• 4. 常見(jiàn)的交聯(lián)方法及原理26-29
• 5. 常見(jiàn)的檢測(cè)交聯(lián)度的方法29-31
• 6. 熒光探針技術(shù)31-35
• 四、結(jié)論35-36
• 附圖36-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 致謝43-44
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文44-45
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表45

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：423504