本文關(guān)鍵詞：可注射磷酸鈣骨水泥凝固初期鈣磷離子的變化對成骨細(xì)胞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 對磷酸鈣骨水泥(calcium phosphate cement,CPC)凝固初期鈣磷離子析出濃度變化進(jìn)行分析；采用單層細(xì)胞及顱蓋骨器官兩種體外培養(yǎng)模式,全面評價(jià)CPC凝固初期鈣磷離子變化對成骨細(xì)胞的影響。 方法 實(shí)驗(yàn)一、CPC凝固初期鈣磷離子濃度變化： 取等量CPC400mg與Na2HPO4溶液進(jìn)行調(diào)拌,用5mlBGJb培養(yǎng)液進(jìn)行浸提。分別用直接浸提法(A組)浸提1、2、3、6、12、24h,固化后浸提法(B組)浸提1h、3h、6h、24h,3d、5d、7d,2w,用全譜直讀型電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(ICP.OES)檢測浸提液中鈣、磷離子濃度,繪制緩釋曲線。 實(shí)驗(yàn)二、單層培養(yǎng)的成骨細(xì)胞在不同濃度鈣、磷離子作用下的影響： 取1d齡的SD乳鼠顱蓋骨,采用兩步消化法獲取成骨細(xì)胞原代后進(jìn)行單層細(xì)胞培養(yǎng),基本培養(yǎng)液為BGJb,1.空白對照組(CON組)培養(yǎng)液內(nèi)僅添加常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)成分2.實(shí)驗(yàn)組(M1組)培養(yǎng)液內(nèi)添加了1.8mmol/L磷離子、0.6mmol/L鈣離子3.陰性對照組(M2組)培養(yǎng)液內(nèi)添加了5.3mmol/L磷離子、1.8mmol/L鈣離子,其余成分均同CON組。通過四唑鹽比色試驗(yàn)(MTT)、茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色(培養(yǎng)14d)、堿性磷酸酶(ALP)活性檢測(培養(yǎng)1、3、7、10d)和實(shí)時(shí)RT-PCR檢測礦化指標(biāo)骨鈣素(OCN)(培養(yǎng)1、3、7、10d)來評價(jià)鈣、磷離子對成骨細(xì)胞增殖和分化能力的影響。 實(shí)驗(yàn)三、不同鈣磷離子對顱蓋骨器官培養(yǎng)的影響： 取1d齡的SD乳鼠顱蓋骨,沿顱骨矢狀縫、冠狀縫、人字形縫剪除額骨、枕骨,僅保留兩側(cè)顱頂骨,利用金屬網(wǎng)格法對顱頂骨進(jìn)行器官培養(yǎng),培養(yǎng)液添加成分和實(shí)驗(yàn)分組同單層成骨細(xì)胞培養(yǎng)。通過MTT法,ALP活性檢測(培養(yǎng)1、3、7、1Od),RT-PCR檢測OCN(培養(yǎng)1、3、7、10d)及顱蓋骨HE染色(培養(yǎng)10d),評價(jià)不同鈣磷離子對顱蓋骨器官培養(yǎng)的影響。 結(jié)果 1、CPC凝固初期鈣、磷離子濃度變化： 直接浸提法結(jié)果顯示在浸提的第1hCPC緩釋能力最強(qiáng),可緩釋出3.56mmol/L磷離子,1.22mmol/L鈣離子,約為B組相同時(shí)間內(nèi)析出的離子濃度的2.8倍；至第2h緩釋能力逐漸減弱,但前3h內(nèi)每小時(shí)緩釋出的鈣、磷離子濃度增加趨勢仍較快,從第3h開始每小時(shí)內(nèi)離子濃度增加趨勢逐漸減慢,緩釋曲線近乎平緩。從第6h至第24h析出濃度為磷離子增加了0.92mmol/L、鈣離子增加了0.32mmol/L。浸提24h析出5.26mmol/L磷離子,1.81mmol/L鈣離子。 固化2h后浸提結(jié)果顯示第1h內(nèi)析出1.27mmol/L磷離子、0.42mmol/L鈣離子；前3h內(nèi)增加的鈣、磷離子濃度較高,但增加的磷離子濃度僅為直接浸提法前3h增加的0.6。從第6h至第24h析出濃度為磷離子增加了1.21mmol/L.鈣離子增加了0.43mmol/L。24h后每天的離子濃度增加趨勢逐漸變小,從第7天后增加趨勢接近平緩。浸提2w析出5.33mmol/L磷離子,1.84mM鈣離子。 2、單層培養(yǎng)的成骨細(xì)胞在不同濃度鈣、磷離子作用下的影響： MTT比色法結(jié)果顯示M1組細(xì)胞增殖能力高于其余兩組,M2組細(xì)胞增殖能力低于對照組。M1組與其余兩組比較,培養(yǎng)14d表現(xiàn)出更多的鈣結(jié)節(jié)沉積。M1組的堿性磷酸酶活性在第3、7、10d高于對照組(P0.05),明顯高于M2組(P0.01)；M2組則低于對照組(P0.05),尤其第7天明顯(P0.01)。Real-time RT-PCR結(jié)果顯示：M1組的成骨細(xì)胞礦化指標(biāo)(OCN)的表達(dá)在第3、7、10d高于對照組(P0.05),明顯高于M2組(P0.01)；M2組則在第7、10d低于對照組(P0.05),尤其第10天明顯(P0.01)。 3、不同鈣磷離子對顱蓋骨器官培養(yǎng)的影響： MTT比色法結(jié)果顯示M1組細(xì)胞增殖能力高于其余兩組,M2組細(xì)胞增殖能力低于對照組。M1組的堿性磷酸酶活性在第3、7、10d明顯高于其余兩組(P0.01)；M2組在第7、10d低于對照組(P0.05)。Real-time RT-PCR結(jié)果顯示：M1組的成骨細(xì)胞礦化指標(biāo)(OCN)的表達(dá)在第3d高于對照組(P0.05)、第7、10d明顯高于對照組(P0.01)；M2組則在第7、10d低于對照組(P0.05)。HE染色結(jié)果M1組成骨細(xì)胞處于功能態(tài),骨基質(zhì)較對照組的厚。 結(jié)論 1.培養(yǎng)基中適當(dāng)增加鈣、磷離子可促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和分化能力；添加過高濃度會產(chǎn)生不利影響,5.3mmol/L磷離子、1.8mmol/L鈣離子可能是添加濃度上限。 2.直接浸提法的結(jié)果,CPC凝固30min即可對周邊的成骨細(xì)胞起到促進(jìn)增殖和分化的作用。 3.顱蓋骨器官培養(yǎng)的辦法可作為牙槽骨成骨機(jī)理及調(diào)節(jié)的研究模型之一。
【關(guān)鍵詞】：磷酸鈣骨水泥 成骨細(xì)胞 顱蓋骨 鈣 磷
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 英文縮略語對照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-16
• 正文16-58
• 實(shí)驗(yàn)一：CPC凝固初期鈣磷離子的濃度變化16-24
• 1. 材料與方法16-18
• 2. 結(jié)果18-19
• 3. 附圖表19-22
• 4. 討論22-23
• 5. 結(jié)論23-24
• 實(shí)驗(yàn)二：單層培養(yǎng)的成骨細(xì)胞在不同濃度鈣、磷離子作用下的影響24-45
• 1. 材料與方法24-33
• 2. 結(jié)果33-35
• 3. 附圖表35-41
• 4. 討論41-44
• 5. 結(jié)論44-45
• 實(shí)驗(yàn)三：不同鈣磷離子對顱蓋骨器官培養(yǎng)的影響45-58
• 1. 材料與方法46-49
• 2. 結(jié)果49-51
• 3. 附圖表51-55
• 4. 討論55-57
• 5. 結(jié)論57-58
• 全文小結(jié)58-59
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 文獻(xiàn)綜述63-72
• 參考文獻(xiàn)69-72
• 致謝72-73
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄73

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：416465