本文關(guān)鍵詞：骨—軟骨生長因子緩釋納米微球研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：組織工程技術(shù)在上個世紀(jì)80年代就已經(jīng)有人開始研究,它代表著醫(yī)學(xué)研究已經(jīng)開始進入到器官克隆新時代。骨組織工程的研究是組織工程的一個重要分支技術(shù),為當(dāng)今骨科醫(yī)學(xué)解決關(guān)節(jié)軟骨損傷修復(fù)的研究熱點方向,并取得了很多研究成果,但在研發(fā)過程中也伴隨著新的問題亟待解決。 修復(fù)損傷器官的組織工程技術(shù)從工程支架,種子細(xì)胞和生長因子三大方面進行研究。生長活性因子在人體內(nèi)的半衰期短,馬上就會被代謝稀釋,完全不能滿足組織自身修復(fù)再生的需要。研制生長因子緩釋微球,其目的在于延長生長因子在體內(nèi)的存活時間,為應(yīng)用組織工程技術(shù)修復(fù)軟骨損傷奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。 生長因子屬蛋白類物質(zhì)容易被體內(nèi)蛋白酶降解,導(dǎo)致其半衰期短,難以滿足組織工程修復(fù)損傷的需要。制備載生長因子緩釋納米微球,旨在延長其在體內(nèi)的存活時間,以一定的緩釋率釋放,誘導(dǎo)種子細(xì)胞分化并形成骨或軟骨組織。我們創(chuàng)建聚羥基丁酸與羥基辛酸(PHBHOx)載骨形成蛋白(rBMP)納米微球制備方法,研發(fā)rBMP-PHBHOx緩釋納米微球,為關(guān)節(jié)一體化支架硬骨區(qū)細(xì)胞提供生長因子。分別采用溶劑揮發(fā)法、靜電紡絲法、W1O/W2超聲乳化法制備微球,并以載藥量、包封率為技術(shù)指標(biāo)經(jīng)正交試驗優(yōu)化了超聲乳化法制備納米微球的操作條件,以磷酸鹽緩沖液作為釋放介質(zhì)(pH7.4)考察微球的體外緩釋性能,并通過真空泵產(chǎn)生負(fù)壓將納米微球膠體液吸納到骨組織工程支架的空隙中去,用電鏡掃描,觀察兩者的粘附性和相容性。在以上三種方法中,靜電紡絲法制備的微球,顆粒較大且在高壓電流作用下可使其rBMP失活；溶劑揮發(fā)法制備的微球易粘連并會形成較大顆粒群。超聲乳化法制備的微球粒徑小,顆粒圓潤,分散性較好。經(jīng)制備條件優(yōu)化,主要制備條件為PHBHOx濃度為6.5%,乳化劑Tween80為5%及Span80為1%,生長因子濃度10%,PVA濃度為3%,有機相水相體積比為3：1。制備的納米微球平均粒徑為(564.75±53.46)nm,載藥量為(1.172±0.262)×10-2%,包封率為(83.50±2.82)%,體外釋藥率13天可達87.89%。微球負(fù)壓法納入骨組織工程支架,可見微球在支架上粘附性好且分布均勻。 本文建立了超聲乳化制備rBMP-PHBHOx新方法,研發(fā)出rBMP-PHBHOx生長因子緩釋納米微球制劑,為一體化支架的骨關(guān)節(jié)損傷修復(fù)研究奠定了一定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 聚羥基丁酸與羥基辛酸 rBMP 緩釋微球 骨組織工程支架
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 中文摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 第一章 文獻綜述14-24
• 1.1 骨組織工程中支架材料14-19
• 1.1.1 支架的作用14-15
• 1.1.2 支架的材料15-19
• 1.1.3 支架制備技術(shù)19
• 1.2 種子細(xì)胞19-21
• 1.2.1 胚胎干細(xì)胞20
• 1.2.2 骨髓干細(xì)胞20-21
• 1.3 生長因子21
• 1.4 微球21
• 1.5 微球的制備技術(shù)21-22
• 1.5.1 機械粉碎法21
• 1.5.2 物理分散法21-22
• 1.5.3 化學(xué)合成法22
• 1.6 存在問題和發(fā)展趨勢22
• 1.7 本論文的立題依據(jù)與研究意義22-23
• 1.8 本論文創(chuàng)新點23-24
• 第二章 聚羥基丁酸羥基辛酸載骨形成蛋白緩釋納米微球研究24-32
• 2.1 材料24
• 2.1.1 主要試劑24
• 2.1.2 主要儀器24
• 2.2 方法24-27
• 2.2.1 不同微球制備方法的比較24-25
• 2.2.2 PHBHOx載rBMP納米微球的超聲乳化法制備及其工藝優(yōu)化25-26
• 2.2.3 PHBHOx載rBMP納米微球的基本特性研究26-27
• 2.2.4 PHBHOx載rBMP納米微球與組織工程支架相容性研究27
• 2.3 結(jié)果與討論27-31
• 2.3.1 PHBHOx納米微球制備方法的篩選27-28
• 2.3.2 超聲乳化法制備PHBHOx納米微球工藝條件研究28
• 2.3.3 超聲乳化法制備PHBHOx載rBMP納米微球28-29
• 2.3.4 PHBHOx載rBMP納米微球的基本特性29-30
• 2.3.5 體外釋藥率測定30
• 2.3.6 PHBHOx載rBMP納米微球應(yīng)用于組織工程支架SEM觀察30-31
• 2.4 結(jié)論31-32
• 第三章 兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離和擴增32-36
• 3.1 材料32-33
• 3.1.1 試驗動物32
• 3.1.2 主要試劑32
• 3.1.3 主要儀器32-33
• 3.2 方法33
• 3.2.1 細(xì)胞提取33
• 3.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)33
• 3.2.3 細(xì)胞的鑒定33
• 3.3 結(jié)果與討論33-35
• 3.3.1 細(xì)胞分離及傳代33-35
• 3.3.2 細(xì)胞的生長曲線35
• 3.4 結(jié)論35-36
• 第四章 聚羥基丁酸羥基辛酸載骨形成蛋白納米緩釋系統(tǒng)對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響36-40
• 4.1 材料36
• 4.1.1 主要試劑36
• 4.1.2 主要儀器36
• 4.2 方法36-37
• 4.2.1 W_1/O/W_2超聲乳化法制備PHBHOx載rBMP納米微球36
• 4.2.2 全骨髓法培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞36
• 4.2.3 實驗分組36-37
• 4.2.4 MTT法檢測細(xì)胞增殖狀況37
• 4.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析37
• 4.3 結(jié)果與討論37-38
• 4.3.1 PHBHOx載rBMP納米微球SEM觀察和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞觀察37
• 4.3.2 不同濃度的單純rBMP、rBMP-P(HBHO)NPs對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖檢測結(jié)果37-38
• 4.4 結(jié)論38-40
• 結(jié)論與展望40-42
• 參考文獻42-47
• 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果47-48
• 致謝48-49
• 個人簡介及聯(lián)系方式49-51

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：骨—軟骨生長因子緩釋納米微球研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：400227