本文關(guān)鍵詞：不同濃度透明質(zhì)酸水凝膠性能表征及其對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維培養(yǎng)生長(zhǎng)行為的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：水凝膠呈半凝固的膠體狀態(tài),可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的三維立體培養(yǎng),消除普通培養(yǎng)皿中出現(xiàn)的“接觸抑制”現(xiàn)象,從而提高培養(yǎng)效率。透明質(zhì)酸是一種分布在多種組織細(xì)胞外基質(zhì)中的蛋白多糖,具有良好生物相容性,并在生物發(fā)育和機(jī)體損傷修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。因此,基于透明質(zhì)酸的水凝膠已成為一種有前景的生物材料,并在三維細(xì)胞培養(yǎng)、組織工程支架以及再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。作為細(xì)胞三維培養(yǎng)基質(zhì),透明質(zhì)酸水凝膠能夠支持細(xì)胞的生長(zhǎng)行為,例如細(xì)胞形態(tài)、存活、增殖、表型和分化等,并能為細(xì)胞的生長(zhǎng)提供理想的微環(huán)境。重要的是細(xì)胞的生長(zhǎng)行為與培養(yǎng)基質(zhì)的機(jī)械性能和內(nèi)部結(jié)構(gòu)關(guān)系密切,這可能是由于細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基質(zhì)的硬度和結(jié)構(gòu)能直接做出應(yīng)答反應(yīng),從而影響自身的一些正常生理活動(dòng)。目前關(guān)于透明質(zhì)酸水凝膠濃度的改變對(duì)水凝膠的基本性能以及水凝膠內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)行為的具體影響還沒(méi)有完全認(rèn)識(shí)清楚,因此,分析設(shè)計(jì)水凝膠的優(yōu)越性能以及建立利于干細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的最佳培養(yǎng)條件對(duì)于組織工程和再生醫(yī)學(xué)的應(yīng)用具有重要意義。 目的：探討透明質(zhì)酸水凝膠濃度的改變對(duì)其機(jī)械性能以及對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維培養(yǎng)生長(zhǎng)行為影響,研究水凝膠黏彈性與細(xì)胞生長(zhǎng)和形態(tài)的關(guān)系,從中尋找到適宜骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維培養(yǎng)的水凝膠濃度。 方法：制備不同濃度的透明質(zhì)酸水凝膠：0.4%,0.8%,1.2%(w/v),對(duì)其機(jī)械性能進(jìn)行表征,包括凝膠時(shí)間、溶脹率、降解速率以及黏彈性；用這3種濃度透明質(zhì)酸水凝膠包封骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行三維培養(yǎng),并以普通培養(yǎng)皿的二維培養(yǎng)作對(duì)照。通過(guò)激光掃描共焦顯微鏡觀(guān)察不同培養(yǎng)條件下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)；采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法描繪骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在不同濃度透明質(zhì)酸水凝膠內(nèi)的生長(zhǎng)曲線(xiàn)；TUNEL法檢測(cè)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維培養(yǎng)凋亡情況；流式細(xì)胞術(shù)鑒定MSCs在水凝膠長(zhǎng)時(shí)間三維培養(yǎng)后的特性和表型。 結(jié)果：對(duì)于不同濃度(0.4%,0.8%,1.2%)的透明質(zhì)酸水凝膠,其濃度越大,凝膠時(shí)間越短,溶脹率越低,降解速率越慢,水凝膠彈性強(qiáng)度越大(P0.05)。激光掃描共焦顯微鏡見(jiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在透明質(zhì)酸水凝膠內(nèi)呈立體圓球形,與二維培養(yǎng)時(shí)呈現(xiàn)的梭形明顯不同；同時(shí),細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在透明質(zhì)酸水凝膠內(nèi)的增殖率高于二維培養(yǎng),并以濃度0.8%透明質(zhì)酸水凝膠的促增殖作用最明顯(P0.05)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在0.8%水凝膠三維培養(yǎng)時(shí)凋亡比例很小,長(zhǎng)時(shí)間三維培養(yǎng)后仍能維持其特性和表型。 結(jié)論：不同濃度的透明質(zhì)酸水凝膠性能存在差異,對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)行為也有影響,透明質(zhì)酸水凝膠濃度的改變會(huì)影響干細(xì)胞三維靜態(tài)培養(yǎng)的生長(zhǎng)行為和表型。濃度為0.8%的透明質(zhì)酸水凝膠更適合大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的三維培養(yǎng)。
【關(guān)鍵詞】：透明質(zhì)酸水凝膠 機(jī)械性能 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 組織工程
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 目錄3-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略語(yǔ)表9-11
• 引言11-16
• 參考文獻(xiàn)12-16
• 第一部分 不同濃度透明質(zhì)酸水凝膠的制備及性能表征16-28
• 1 前言16-17
• 2 材料和方法17-20
• 2.1 主要試劑17
• 2.2 主要試劑配制方法17
• 2.3 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備17-18
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法18-20
• 3 結(jié)果20-23
• 3.1 不同濃度透明質(zhì)酸水凝膠的凝膠時(shí)間20
• 3.2 不同濃度透明質(zhì)酸水凝膠的溶脹率20-21
• 3.3 不同濃度透明質(zhì)酸水凝膠的體外酶降解速率21-22
• 3.4 不同濃度透明質(zhì)酸水凝膠的黏彈性22-23
• 4 討論23-24
• 5 結(jié)論24-25
• 參考文獻(xiàn)25-28
• 第二部分 透明質(zhì)酸水凝膠機(jī)械性能對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞三維培養(yǎng)生長(zhǎng)行為的影響28-52
• 1 前言28-29
• 2 材料和方法29-38
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物29
• 2.2 主要試劑29-30
• 2.3 主要試劑配制方法30-31
• 2.4 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備31-32
• 2.5 實(shí)驗(yàn)方法32-38
• 3 結(jié)果38-46
• 3.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀(guān)察38-39
• 3.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的表型鑒定39
• 3.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維培養(yǎng)的形態(tài)觀(guān)測(cè)39-43
• 3.4 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維培養(yǎng)的增殖情況43
• 3.5 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維培養(yǎng)凋亡情況43-44
• 3.6 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維培養(yǎng)特性和表型維持44-46
• 4 討論46-47
• 5 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 文獻(xiàn)綜述52-66
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 致謝66-67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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4 王濤;蔣學(xué)俊;;智能化水凝膠在原位心肌組織工程的應(yīng)用[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2008年05期

  本文關(guān)鍵詞：不同濃度透明質(zhì)酸水凝膠性能表征及其對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維培養(yǎng)生長(zhǎng)行為的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：398846