在很多骨折或者骨缺損的病例中,患者通常處于炎癥環(huán)境下。TNF-α作為一種常規(guī)的炎性細(xì)胞因子,具有調(diào)控關(guān)鍵細(xì)胞因子(包括抗炎細(xì)胞因子)的重要作用,被稱為“主調(diào)控因子”。高濃度的TNF-α?xí)鰪?qiáng)骨吸收并且抑制BMP-2誘導(dǎo)的骨生成,延緩骨修復(fù)的進(jìn)程。而采取生物可降解支架與拮抗TNF-α的活性因子復(fù)合來(lái)進(jìn)行骨缺損修復(fù)已成為骨再生領(lǐng)域的新策略之一。研究表明,PGRN及其人工重組蛋白Atsttin能夠與TNF-α受體TNFR結(jié)合而對(duì)TNF-a有拮抗作用,保護(hù)炎癥性的骨腐蝕,延緩類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的進(jìn)程。因此,我們假設(shè),將Atsttrin與生物可降解支架復(fù)合,利用3D打印技術(shù)制作3D活性支架進(jìn)行移植治療,可促進(jìn)骨修復(fù)。本項(xiàng)研究的主要內(nèi)容是將3D打印技術(shù)、海藻酸鈉水凝膠材料以及生長(zhǎng)因子Atsttrin等組織工程要素相結(jié)合,利用3D打印技術(shù)制造海藻酸鈉／羥基磷灰石水凝膠復(fù)合Atsttrin蛋白的3D活性支架,并且檢測(cè)該生物活性支架的相關(guān)性能。然后我們分別在體外細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物模型中研究了這個(gè)活性支架拮抗TNF-α并且促進(jìn)骨修復(fù)的功能。本研究分為三部分：(1)Atsttrin在炎癥環(huán)境下促進(jìn)MSc成骨分化的作用...

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
1 緒論
2 Atsttrin改善炎癥環(huán)境下MSC成骨分化能力
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        2.2.1 材料和試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及材料
        2.2.3 相關(guān)試劑的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞凍存
        2.3.2 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.3.3 BMP-2誘導(dǎo)的成骨分化
        2.3.4 提取RNA
        2.3.5 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        2.3.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real time PCR)
        2.3.7 堿性磷酸酶Alkaline Phosphatase(ALP)染色
        2.3.8 ALP活性檢測(cè)
        2.3.9 茜素紅染色
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 TNF-α抑制BMP-2誘導(dǎo)的MSC成骨分化
        2.4.2 添加Atsttrin削弱TNF-α對(duì)BMP-2誘導(dǎo)成骨分化的抑制作用
    2.5 討論
3 緩釋Atsttrin的3D活性支架的制備及生物學(xué)檢測(cè)
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        3.2.1 材料和試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 相關(guān)試劑配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 緩釋Atsttrin的海藻酸鈉/羥基磷灰石生物活性支架的制備
        3.3.2 海藻酸鈉/羥基磷灰石生物活性支架的表征
        3.3.3 海藻酸鈉/羥基磷灰石生物活性支架對(duì)Atsttrin的可控釋放
        3.3.4 支架的生物相容性研究
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 氣動(dòng)凝膠纖維打印機(jī)配置
        3.4.2 打印參數(shù)優(yōu)化
        3.4.3 海藻酸鈉/羥基磷灰石生物活性支架形貌分析
        3.4.4 海藻酸鈉/羥基磷灰石生物活性支架對(duì)Atsttrin的可控釋放
        3.4.5 海藻酸鈉/羥基磷灰石生物活性支架的細(xì)胞毒性檢測(cè)
        3.4.6 海藻酸鈉/羥基磷灰石生物活性支架上細(xì)胞粘附觀察
        3.4.7 海藻酸鈉/羥基磷灰石生物活性支架上細(xì)胞形態(tài)的觀察
    3.5 討論
4 緩釋Atsttrin的3D活性支架修復(fù)顱骨缺損的效應(yīng)及其機(jī)制探討
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        4.2.1 材料和試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及材料
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.2.4 相關(guān)溶液的配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 顱骨缺損動(dòng)物模型
        4.3.2 X光檢測(cè)
        4.3.3 組織學(xué)檢測(cè)
        4.3.4 免疫組化染色
        4.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 建立小鼠顱骨缺損模型
        4.4.2 8周&16周顱骨缺損部位修復(fù)的X射線檢測(cè)
        4.4.3 8周&16周顱骨缺損部位修復(fù)的組織學(xué)染色
        4.4.4 小鼠顱骨缺損手術(shù)7天后缺損部位TNF-α的免疫組化檢測(cè)
        4.4.5 小鼠顱骨缺損手術(shù)后16周時(shí)缺損部位Runx2的免疫組化檢測(cè)
    4.5 討論
5 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷及在學(xué)成果



本文編號(hào)：3935814