本文關(guān)鍵詞：LCC支架材料的制備及其在人體正常肝細胞L-02培養(yǎng)中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝臟是人體重要的器官之一，然而每年都會有大量的人因為肝癌、急性肝衰竭死亡，肝移植是目前最好的醫(yī)治方法，尋找合適的支架材料是利用自身肝細胞進行體外人工肝臟的基礎(chǔ)行研究工作。木素-碳水化合物復(fù)合體（Lignin-carbohydrate complexes，LCC）具有良好的兩親性、生物相容性、無毒性、可降解性等特性，是一種很好的醫(yī)用高分子材料。本研究對LCC在組織工程中的應(yīng)用進行了研究。 本文從針葉木（銀杏）、闊葉木（楊木）和禾本科（麥草）中提取LCC，然后分離出水可溶性LCC和水不可溶性LCC進行人體正常肝細胞L-02體外培養(yǎng)的研究。 利用FT-IR和液相色譜對水可溶性LCC的化學(xué)結(jié)構(gòu)和主要成分含量進行分析，然后將水可溶性LCC進行人體正常肝細胞L-02的培養(yǎng)，利用血細胞計數(shù)、倒置相差生物顯微鏡對細胞的增殖和形態(tài)進行觀察，并檢測肝細胞的代謝活性。研究結(jié)果表明：銀杏水可溶性LCC中半乳糖和甘露糖組分含量分別為2.05%和28.31%，楊木水可溶性LCC中半乳糖和甘露糖組分含量分別為5.59%和24.5%，，小麥水可溶性LCC中甘露糖組分含量為10.62%，半乳糖含量很低。在培養(yǎng)的第4d，肝細胞增殖最快，細胞數(shù)量達到最大值，肝細胞增殖速率為楊木可溶性LCC實驗組＞銀杏可溶性LCC實驗組＞對照組＞小麥可溶性LCC實驗組，表明原料中半乳糖和甘露糖含量高更有利于細胞的增殖。肝細胞白蛋白、血尿素氮和葡萄糖代謝活性的測定結(jié)果表明與未加入水可溶性LCC實驗結(jié)果相比，加入水可溶性LCC培養(yǎng)的細胞具有較高的代謝活性。 以銀杏和楊木水不溶性LCC為原料，采用冷凍干燥法制備球形生物載體，利用掃描電子顯微鏡、液相色譜、FT-IR等對制成的生物載體形態(tài)、物理和化學(xué)性質(zhì)進行分析，然后將球形生物載體進行進行人體正常肝細胞L-02的培養(yǎng)，利用血細胞計數(shù)、倒置相差生物顯微鏡和掃描電子顯微鏡對細胞的增殖和形態(tài)進行觀察，并檢測肝細胞的代謝活性。研究結(jié)果表明：銀杏水不溶性LCC球形生物載體中半乳糖和甘露糖組分含量分別為3.30%和21.94%、3.82%和25.25%，楊木水不溶性LCC球形生物載體中半乳糖和甘露糖組分含量分別為3.82%和25.25%，制備的銀杏和楊木水不溶性LCC球形生物載體的比表面積分別為17m2/g和9m2/g球形載體生物的干球直徑為1.8mm~2.0mm。在培養(yǎng)的第5d，肝細胞增殖最快，細胞數(shù)量達到最大值，在倒置相差生物顯微鏡和掃描電子顯微鏡下，發(fā)現(xiàn)球形生物載體上成功地黏附有許多人肝細胞L-02，且在楊木球形生物額載體上生長的肝細胞數(shù)比銀杏球形生物載體上生長的細胞數(shù)多，肝細胞增殖速率和ALB、BUN、GLU代謝活性為楊木水不溶性LCC實驗組＞銀杏水不溶性LCC實驗組＞對照組。LCC是一種良好的醫(yī)用高分子材料，為LCC在組織工程中的應(yīng)用奠定了良好的基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：木素-碳水化合物復(fù)合體 生物載體 肝細胞 培養(yǎng) 代謝活性
【學(xué)位授予單位】：湖北工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08;TQ351.01
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目錄8-11
• 第1章 引言11-21
• 1.1 肝組織工程的介紹11
• 1.2 肝組織工程支架材料的基本要求11
• 1.3 天然生物醫(yī)用高分子材料11-15
• 1.3.1 膠原12
• 1.3.2 絲蛋白12-13
• 1.3.3 殼聚糖13-14
• 1.3.4 纖維素14
• 1.3.5 木素-碳水化合物復(fù)合體14-15
• 1.4 木素-碳水化合物復(fù)合體與動物細胞的結(jié)合能力15-16
• 1.5 天然 LCC 的生理活性和生物相容性16-17
• 1.6 微載體的制備方法17-19
• 1.6.1 冷凍干燥法17
• 1.6.2 反相膠束法17-18
• 1.6.3 乳化交聯(lián)法18
• 1.6.4 噴霧干燥法18
• 1.6.5 凝聚/沉淀法18
• 1.6.6 離子凝聚法18-19
• 1.7 本研究的目的及主要內(nèi)容19-21
• 1.7.1 本研究的目的及意義19-20
• 1.7.2 本研究的主要內(nèi)容20-21
• 第2章 可溶性 LCC 在人肝細胞培養(yǎng)中應(yīng)用的研究21-41
• 2.1 引言21-22
• 2.2 實驗22-28
• 2.2.1 實驗試劑與儀器22-23
• 2.2.2 可溶性 LCC 的提取23-25
• 2.2.3 紅外光譜檢測25
• 2.2.4 成分測定25-26
• 2.2.5 人肝細胞 L-02 體外培養(yǎng)26-27
• 2.2.6 人肝細胞 L-02 的形態(tài)觀察27
• 2.2.7 人肝細胞代謝活性的檢測27-28
• 2.3 結(jié)果與討論28-40
• 2.3.1 紅外光譜分析28-30
• 2.3.2 成分分析30
• 2.3.3 人肝細胞 L-02 形態(tài)學(xué)分析30-36
• 2.3.4 代謝活性檢測的結(jié)果36-40
• 2.4 本章小結(jié)40-41
• 第3章 不溶性 LCC 生物載體的制備及人肝細胞培養(yǎng)的研究41-67
• 3.1 引言41-42
• 3.2 實驗42-48
• 3.2.1 實驗試劑與設(shè)備42-43
• 3.2.2 不溶性 LCC 的分離43
• 3.2.3 不溶性 LCC 球形生物載體的制備43-44
• 3.2.4 球形生物載體材料的 FT-IR 分析44
• 3.2.5 球形生物載體材料成分分析44-45
• 3.2.6 球形生物載體表征45-46
• 3.2.7 不溶性 LCC 球形生物載體在人體正常肝細胞 L-02 的體外培養(yǎng)46-47
• 3.2.8 人體正常肝細胞 L-02 的形態(tài)觀察47
• 3.2.9 人肝細胞代謝活性的檢測47-48
• 3.3 結(jié)果與討論48-65
• 3.3.1 球形生物載體材料 FT-IR 分析48-50
• 3.3.2 球形生物載體材料成分分析50-51
• 3.3.3 球形生物載體的形態(tài)分析51-52
• 3.3.4 球形生物載體的直徑分析52-53
• 3.3.5 球形生物載體比表面積與孔徑分析53-54
• 3.3.6 球形生物載體穩(wěn)定性分析54
• 3.3.7 LCC 球形生物載體培養(yǎng)的人肝細胞 L-02 形態(tài)分析54-61
• 3.3.8 人肝細胞 L-02 代謝活性檢測61-65
• 3.4 本章小結(jié)65-67
• 結(jié)論67-69
• 參考文獻69-75
• 致謝75-76
• 附錄一 攻讀碩士學(xué)位間參與的科研及發(fā)表的文章76

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：LCC支架材料的制備及其在人體正常肝細胞L-02培養(yǎng)中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：391621