本文關(guān)鍵詞：膠原水凝膠支架用于軟骨組織工程的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討Ⅰ型膠原濃度對(duì)膠原水凝膠理化性能的影響,以及在體外組織工程模型中不同濃度的Ⅰ型膠原水凝膠對(duì)軟骨細(xì)胞表型和基因表達(dá)的影響。方法制備Ⅰ型膠原濃度為12、8、6 mg/mL的3種膠原水凝膠,記為C12、C8、C6。掃描電鏡觀察形貌,并通過(guò)溶脹性能和抗壓性能測(cè)試表征其理化性能。取2只新生7日齡新西蘭大白兔的關(guān)節(jié)軟骨,酶消化法分離、培養(yǎng)軟骨細(xì)胞。取第2代軟骨細(xì)胞與3種膠原水凝膠復(fù)合體外培養(yǎng)(C12組、C8組及C6組),1 d后采用二乙酸熒光素(fluorescein diacetate,FDA)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色,激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞活性,體外培養(yǎng)14 d后行HE和甲苯胺藍(lán)染色觀察組織學(xué)形態(tài),實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定軟骨細(xì)胞相關(guān)基因,即Ⅱ型膠原、蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅰ型膠原、Ⅹ型膠原、Sox9 mRNA表達(dá)。結(jié)果隨著Ⅰ型膠原濃度從6 mg/mL提高到12 mg/mL,膠原水凝膠的理化性質(zhì)出現(xiàn)明顯變化,掃描電鏡下纖維網(wǎng)絡(luò)變得致密;192 h時(shí)C6、C8、C12溶脹率依次增大,分別為0.260±0.055、0.358±0.072、0.539±0.033,比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);壓縮模量逐漸增加,分別為(4.86±0.96)、(7.09±2.33)、(11.08±3.18)kPa,比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。體外培養(yǎng)1 d,3組凝膠中軟骨細(xì)胞經(jīng)FDA/PI染色后,絕大部分被染成綠色,僅有少數(shù)被染成紅色。14 d后組織學(xué)觀察示:C12組軟骨細(xì)胞在組織中聚集明顯,并出現(xiàn)明顯的甲苯胺藍(lán)異染為紫紅色的現(xiàn)象;C8組中也有部分增殖聚集的區(qū)域,細(xì)胞周?chē)休^明顯的甲苯胺藍(lán)異染現(xiàn)象;C6組細(xì)胞分布較為均勻,也有較明顯的甲苯胺藍(lán)異染現(xiàn)象。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)顯示,3組Ⅱ型膠原mRNA和Aggrecan mRNA表達(dá)水平相近;Ⅰ型膠原、Sox9和X型膠原mRNA表達(dá)水平C12組最高,C6組最低,C8組介于二者之間,組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論提高Ⅰ型膠原濃度至12 mg/mL后,膠原水凝膠具有更好的理化性質(zhì),但軟骨細(xì)胞纖維化和肥大相關(guān)基因表達(dá)也有所上調(diào)。
【作者單位】： 四川大學(xué)國(guó)家生物醫(yī)學(xué)材料工程技術(shù)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 軟骨組織工程 Ⅰ型膠原 膠原水凝膠 軟骨細(xì)胞 支架材料
【基金】：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973)資助項(xiàng)目(2011CB606201)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R318.08
【正文快照】： 關(guān)節(jié)軟骨自我修復(fù)能力差,臨床上對(duì)于關(guān)節(jié)炎和創(chuàng)傷導(dǎo)致的關(guān)節(jié)軟骨損傷尚無(wú)有效修復(fù)手段。隨著生物學(xué)和材料學(xué)的發(fā)展,軟骨組織工程為軟骨修復(fù)提供了新思路[1]。Ⅰ型膠原是組織分布最廣泛的膠原蛋白[2],具有良好的生物相容性、降解性以及獨(dú)特的生物學(xué)性質(zhì),已在臨床多個(gè)領(lǐng)域得到

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本文編號(hào)：386678