本文關(guān)鍵詞：模擬皮膚發(fā)育構(gòu)建含附件組織工程皮膚的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：應(yīng)用刀片刮取法及酶消化法獲取胎鼠和小鼠表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，對獲得的表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、鑒定，并應(yīng)用獲得的表皮細(xì)胞作為種子細(xì)胞，PGA作為支架，初步構(gòu)建含附件組織工程皮膚，為胎鼠表皮細(xì)胞的多向分化潛能提供良好的實驗?zāi)Ｐ�，并力求獲得生物學(xué)性能更完整的組織工程皮膚，為臨床應(yīng)用提供更理想的生物修復(fù)材料。 方法：對刀片刮取法及酶消化法獲取的胎鼠和小鼠表皮細(xì)胞，以角質(zhì)細(xì)胞無血清培養(yǎng)基（K-SFM）進(jìn)行培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長狀況及克隆形成情況，選擇Pan-CK多克隆抗體對細(xì)胞進(jìn)行鑒定；對酶消化法獲取的胎鼠和小鼠成纖維細(xì)胞，以DMEM進(jìn)行培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長狀況及克隆形成情況，選擇vimentin單克隆抗體對細(xì)胞進(jìn)行鑒定；應(yīng)用培養(yǎng)的表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及PGA支架初步構(gòu)建組織工程皮膚，觀察形成皮膚及附件的情況。 結(jié)果：1.不同發(fā)育階段胎鼠和小鼠皮膚組織結(jié)構(gòu)觀察揭示了皮膚附件的生長發(fā)育規(guī)律，即在胚胎14.5天(embryo14.5天, E14.5天）時，雖然表皮細(xì)胞僅為1-2層，但皮膚附件發(fā)育已經(jīng)開始，，E16.5天時是皮膚附件發(fā)育最為旺盛的時期，E18.5天皮膚附件發(fā)育基本完成，生后7天(postnatal7,P7)時皮膚附件發(fā)育成熟。 2.應(yīng)用刀片刮取法能成功獲取E14.5天的胎鼠表皮細(xì)胞，并能建立穩(wěn)定的表皮細(xì)胞系。 3應(yīng)用酶消化法能分別獲取E16.5天，E18.5天，生后7天的胎鼠和小鼠表皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞，并能建立穩(wěn)定的細(xì)胞系。 4.經(jīng)培養(yǎng)出的E14.5天胎鼠表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和PGA支架構(gòu)建的組織工程皮膚，組織切片可見人造皮膚大體形態(tài)比較接近正常皮膚，表皮分層分化較完善，可見基底層、棘細(xì)胞層及角化層。 結(jié)論：1.通過對不同發(fā)育階段胎鼠和小鼠皮膚組織結(jié)構(gòu)的觀察，我們初步掌握了皮膚附件的生長發(fā)育規(guī)律。 2.刀片刮取法是一種獲取E14.5天的胎鼠表皮細(xì)胞較好的方法，可以得到數(shù)量較多，細(xì)胞活力較好的E14.5天的胎鼠表皮干細(xì)胞。 3.消化法是一種獲得E16.5天，E18.5天，生后7天的胎鼠和小鼠表皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞的穩(wěn)定的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。 4.用E14.5天胎鼠表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和PGA支架構(gòu)建的組織工程皮膚，表皮結(jié)構(gòu)較好，基本形態(tài)比較接近正常皮膚。 本實驗以PGA為支架，通過胚胎小鼠來提供表皮細(xì)胞和真皮成纖維細(xì)胞，從而首次構(gòu)建含附件的組織工程皮膚的模型，為以后構(gòu)建真正意義上的含附件的組織工程皮膚提供了可靠的理論和實驗依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：組織工程皮膚 皮膚附件 表皮細(xì)胞 PGA
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 第1章 引言9-13
• 1.1 概述9
• 1.2 構(gòu)建含附件組織工程皮膚的兩個重要因素9-11
• 1.2.1 多向分化潛能的種子細(xì)胞10-11
• 1.2.2 適合的真皮來源的刺激信號11
• 1.3 本研究的總體思路11-13
• 第2章 基礎(chǔ)材料、基礎(chǔ)試劑及主要儀器13-15
• 2.1 基礎(chǔ)材料13
• 2.2 基礎(chǔ)試劑13
• 2.3 主要儀器13-14
• 2.4 其他試劑的配制14-15
• 第3章 不同發(fā)育階段胎鼠和小鼠皮膚組織結(jié)構(gòu)觀察15-20
• 3.1 材料與方法15-16
• 3.1.1 主要材料15
• 3.1.2 主要試劑15
• 3.1.3 方法15-16
• 3.2 結(jié)果16-18
• 3.2.1 不同發(fā)育階段胎鼠和小鼠皮膚組織結(jié)構(gòu)的變化16-17
• 3.2.2 不同發(fā)育階段的胎鼠和小鼠皮膚免疫熒光17-18
• 3.3 討論18-20
• 第4章 不同發(fā)育階段胎鼠和小鼠表皮細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定20-24
• 4.1 材料與方法20-21
• 4.1.1 主要材料20
• 4.1.2 主要試劑20
• 4.1.3 方法20-21
• 4.2 結(jié)果21-23
• 4.3 討論23-24
• 第5章 不同發(fā)育階段胎鼠和小鼠成纖維細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定24-28
• 5.1 材料與方法24-25
• 5.1.1 主要材料24
• 5.1.2 主要試劑24
• 5.1.3 方法24-25
• 5.2 結(jié)果25-27
• 5.3 討論27-28
• 第6章 含附件組織工程皮膚模型的初步構(gòu)建28-35
• 6.1 材料和方法28-29
• 6.1.1 主要材料28
• 6.1.2 主要試劑28
• 6.1.3 方法28-29
• 6.2 結(jié)果29-32
• 6.2.1 離體的 E14.5 天的胚胎小鼠皮膚體外器官培養(yǎng)29-30
• 6.2.2 PGA 支架材料的制備30-31
• 6.2.3 用 E14.5 天胎鼠的表皮細(xì)胞構(gòu)建復(fù)合皮膚31-32
• 6.3 討論32-35
• 第7章 全文總結(jié)35-36
• 致謝36-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果41-42
• 綜述42-49
• 參考文獻(xiàn)47-49

  本文關(guān)鍵詞：模擬皮膚發(fā)育構(gòu)建含附件組織工程皮膚的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：384810