宮腔手術(shù)或感染等原因一旦傷及子宮基底層,將導致子宮內(nèi)膜修復再生障礙、宮腔纖維化、瘢痕化、粘連,嚴重者可導致育齡婦女不孕。目前的防治手段(防止纖維化、粘連及促進受損區(qū)域血管再生等)只適合小面積和薄層子宮內(nèi)膜損傷,尚無有效的手段修復大面積、全層子宮損傷,而組織工程技術(shù)是子宮再生修復最具潛力的方法之一。如今用于子宮再生修復的支架主要以單層支架為主,缺乏對子宮生理結(jié)構(gòu)的仿生,選擇合適的多層仿生支架,用以模擬體內(nèi)子宮上皮層、內(nèi)膜層、肌層等多層結(jié)構(gòu),對于全層子宮的功能再生至關(guān)重要。本研究展示了一種可負載細胞的3D生物打印雙層仿生支架用于大鼠子宮全層損傷的再生修復,通過優(yōu)化海藻酸鈉和透明質(zhì)酸的混合比例制成復合水凝膠,作為打印的生物墨水,運用3D生物打印技術(shù)構(gòu)建含子宮內(nèi)膜腔上皮層和子宮內(nèi)膜功能層的雙層支架。采用擠出式3D生物打印方法,首先將海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠與新生大鼠子宮基質(zhì)細胞混合后打印出具有縱橫交錯網(wǎng)格結(jié)構(gòu)的多層子宮內(nèi)膜功能層,再將海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠與新生大鼠子宮上皮細胞混合制成單層子宮內(nèi)膜腔上皮層,進而構(gòu)成新型雙層仿生支架。體外實驗證明該支架擁有良好的機械強度(191.5±14.98...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學位級別】：碩士

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致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞
緒論
第一章 3D打印雙層仿生支架的制備和表征
    1.1 引言
    1.2 實驗儀器和材料
        1.2.1 材料和試劑
        1.2.2 實驗儀器
        1.2.3 相關(guān)溶液的配置
            1.2.3.1 外用PBS溶液配制
            1.2.3.2 細胞房用PBS溶液配制
            1.2.3.31 0%水合氯醛溶液配制
            1.2.3.45 %氯化鈣溶液配制
            1.2.3.5 海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠配制
        1.2.4 實驗動物
    1.3 實驗方法
        1.3.1 優(yōu)化海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠濃度比例
            1.3.1.1 海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠的配制
            1.3.1.2 海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠大體圖觀察
            1.3.1.3 海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠的力學性能檢測
            1.3.1.4 海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠微觀形態(tài)觀察
        1.3.2 海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠的生物學性能檢測
            1.3.2.1 海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠的細胞增殖曲線檢測
            1.3.2.2 海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠的細胞活性檢測
            1.3.2.3 海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠體內(nèi)組織相容性檢測
        1.3.3 新生大鼠子宮原代上皮細胞和基質(zhì)細胞分離和培養(yǎng)
            1.3.3.1 新生大鼠子宮原代上皮細胞和基質(zhì)細胞分離
            1.3.3.2 細胞凍存
        1.3.4 新生大鼠子宮原代上皮細胞和基質(zhì)細胞鑒定
            1.3.4.1 新生大鼠子宮原代上皮細胞和基質(zhì)細胞表面標記物鑒定
            1.3.4.2 新生大鼠子宮原代上皮細胞和基質(zhì)細胞RNA水平表達鑒定
        1.3.5 3D打印的負載細胞的海藻酸鈉-透明質(zhì)酸雙層仿生支架的體外表征
            1.3.5.1 海藻酸鈉-透明質(zhì)酸雙層仿生支架的3D打印
            1.3.5.2 海藻酸鈉-透明質(zhì)酸雙層仿生支架的形態(tài)觀察
            1.3.5.3 3D打印的海藻酸鈉-透明質(zhì)酸雙層仿生支架的熒光表征
            1.3.5.4 3D打印的海藻酸鈉-透明質(zhì)酸雙層仿生支架的細胞活性
    1.4 實驗結(jié)果
        1.4.1 優(yōu)化海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠濃度比例
        1.4.2 海藻酸鈉-透明質(zhì)酸水凝膠生物學性能檢測
        1.4.3 新生大鼠子宮原代上皮細胞和基質(zhì)細胞分離培養(yǎng)及鑒定
        1.4.4 3D打印的負載細胞的海藻酸鈉-透明質(zhì)酸雙層仿生支架的表征
    1.5 討論
第二章 3D打印雙層仿生支架修復大鼠子宮局部全層缺損的效果及機制研究
    2.1 引言
    2.2 實驗儀器和材料
        2.2.1 材料與試劑
        2.2.2 實驗儀器
        2.2.3 相關(guān)試劑配制
            2.2.3.1 4%多聚甲醛溶液配制
            2.2.3.2 抗原修復液配制
            2.2.3.3 鹽酸酒精配制
            2.2.3.4 伊紅溶液配制
            2.2.3.5 麗春紅-品紅溶液配制
            2.2.3.6 2%苯胺藍溶液配制
            2.2.3.7 磷鉬酸溶液配制
            2.2.3.8 1%冰醋酸溶液配制
            2.2.3.9 3%過氧化氫溶液配制
            2.2.3.10 1%BSA配制
            2.2.3.11 免疫組化及免疫熒光抗體配制
        2.2.4 實驗動物
    2.3 實驗方法
        2.3.1 大鼠子宮局部全層缺損模型的構(gòu)建
        2.3.2 組織學分析
            2.3.2.1 大鼠子宮樣本包埋
            2.3.2.2 HE染色
            2.3.2.3 Masson染色
            2.3.2.4 免疫組化染色
            2.3.2.5 免疫熒光染色
            2.3.2.6 缺損部位再生子宮內(nèi)膜厚度測量
            2.3.2.7 缺損部位再生子宮平滑肌含量測量
            2.3.2.8 缺損部位再生微血管密度計數(shù)
        2.3.3 再生子宮內(nèi)膜功能性檢測
        2.3.4 統(tǒng)計方法
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 3D打印雙層仿生支架促進大鼠子宮局部全層缺損再生
        2.4.2 子宮缺損再生部位的組織學分析
            2.4.2.1 子宮缺損部位再生子宮內(nèi)膜厚度
            2.4.2.2 子宮缺損部位再生平滑肌含量
            2.4.2.3 子宮缺損部位再生內(nèi)膜中微血管形成
        2.4.3 子宮損傷修復后的功能性檢測
    2.5 討論
總結(jié)
參考文獻
綜述 組織工程技術(shù)在子宮重建中的運用
    參考文獻
作者簡歷



本文編號：3773934