銀納米粒子作為易于合成和修飾的等離子體納米材料之一,具有獨特且優(yōu)越的光學性質(zhì),如高的摩爾消光系數(shù)、表面增強拉曼散射效應、金屬表面增強熒光效應,局域表面等離子體共振效應等。銀納米粒子在許多生物標志物以及藥物、污染物等的檢測中發(fā)揮出良好的效果。miRNAs又稱為微小RNA,是一種同源性高、序列短、易于降解的內(nèi)源性非編碼的單鏈RNA,研究證明miRNAs與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展具有密切的相關性,不同種類的miRNAs能夠作為原癌基因或者抑癌基因發(fā)揮生命調(diào)節(jié)作用。因此準確、靈敏地檢測miRNAs對腫瘤的早期診斷和治療具有重要價值。本論文以在多種癌癥細胞內(nèi)高水平表達的miRNA-21作為檢測對象,基于熒光偏振檢測,熒光成像及檢測等方法,設計了一系列銀納米粒子探針,并將其用于miRNA-21的定量檢測以及細胞內(nèi)成像分析。具體研究內(nèi)容包括:(1)發(fā)展了一種基于Ag₁₀NPs與鏈取代反應共同發(fā)揮作用的高靈敏miRNA-21分析檢測方法,能夠在標準體系以及真實生物樣品中實現(xiàn)miRNAs的快速、準確和靈敏檢測。它是一種恒溫、不需要酶輔助的檢測方法,克服了其他檢測方法步驟復雜、反應時間長、需...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 貴金屬納米材料概述
    1.2 銀納米粒子的合成
    1.3 銀納米粒子的功能化修飾
    1.4 銀納米粒子在生物傳感平臺構建中的應用
        1.4.1 比色法
        1.4.2 熒光法
        1.4.3 表面增強拉曼散射法
    1.5 基于DNA納米技術的信號放大方法
    1.6 本研究論文的構思
    參考文獻
第二章 基于核酸修飾納米銀的循環(huán)鏈取代檢測miRNA-21的熒光偏振方法
    2.1 前言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 材料與試劑
        2.2.2 十面體納米銀Ag₁₀NPs的合成
        2.2.3 Ag₁₀NPs的功能化修飾及表征
        2.2.4 凝膠電泳實驗
        2.2.5 緩沖溶液中miRNA-21的熒光偏振檢測
        2.2.6 總RNA提取物的制備
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 十面體納米銀Ag₁₀NPs材料的表征
        2.3.2 基于Ag₁₀NPs與循環(huán)鏈取代反應的信號放大策略
        2.3.3 基于核酸修飾納米銀的循環(huán)鏈取代檢測miRNA-21的熒光偏振方法的可行性研究
        2.3.4 基于核酸修飾納米銀的循環(huán)鏈取代檢測miRNA-21的熒光偏振方法的條件優(yōu)化
        2.3.5 緩沖液體系中目標檢測物miRNA-21的線性檢測
        2.3.6 特異性檢測
        2.3.7 真實樣品中miRNA-21的檢測
    2.4 本章總結(jié)
    參考文獻
第三章 單細胞水平miRNA-21的檢測與成像
    3.1 前言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 材料與試劑
        3.2.2 十面體納米銀Ag₁₀NPs的合成
        3.2.3 DNA修飾的納米銀探針的合成
        3.2.4 質(zhì)粒擴增與質(zhì)粒提取
        3.2.5 熒光共定位信號的采集
            3.2.5.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
            3.2.5.2 納米銀探針孵育
            3.2.5.3 熒光信號采集
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 納米銀探針的設計與條件優(yōu)化
            3.3.1.1 納米銀探針熒光基團的選擇
            3.3.1.2 探針的穩(wěn)定性與條件優(yōu)化
            3.3.1.3 納米銀與熒光基團之間的距離優(yōu)化
            3.3.1.4 納米銀探針上帶有的功能性基團選擇
            3.3.1.5 反應時間優(yōu)化
        3.3.2 緩沖液體系中納米銀探針的靈敏度檢測
        3.3.3 探針對于不同細胞的特異性
        3.3.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染條件篩選
        3.3.5 細胞內(nèi)的熒光共定位成像
    3.4 本章總結(jié)
    參考文獻
附錄 攻讀碩士學位期間已發(fā)表或待發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3768671