背景:高分辨熔解曲線分析(HRM)技術(shù)是一種由熔解曲線技術(shù)為基礎(chǔ)發(fā)展起來的核酸分析技術(shù)。由于該技術(shù)是一種操作簡單、快速且成本低的核酸分析方法,HRM技術(shù)從其誕生伊始就受到了廣泛的關(guān)注,基于HRM的新型檢測方法也不斷出現(xiàn)。Williams-Beuren綜合征(WBS)是一種嚴(yán)重且較為常見的多系統(tǒng)缺陷綜合征,7號染色體長臂7q11.23區(qū)域的雜合缺失被認(rèn)為是該病的病因,相同區(qū)域的拷貝數(shù)重復(fù)也會造成多系統(tǒng)的發(fā)育異常。氯吡格雷是一種急性冠脈綜合征和經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)后常用藥物,CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP2C19*17、PON1 Q192R以及ABCB1 C3435T的基因多態(tài)性會導(dǎo)致患者出現(xiàn)氯吡格雷低應(yīng)答現(xiàn)象。喹硫平與阿立哌唑是兩種常用的第二代精神藥物,其藥效和副作用分別受到CYP1A2*1F、CYP3A5*3和CYP3A4*1G、ANKK1 Taq1A的影響。目的:利用dNTP限制性PCR和HRM技術(shù)聯(lián)用,建立一種用于檢測7q11.23區(qū)域微缺失/微重復(fù)的方法;利用5’GC堿基修飾的引物和多重HRM技術(shù),建立一種用于檢測氯吡格雷精準(zhǔn)用藥相關(guān)的5個SNP位點的方法;利用多色...

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 分子診斷常用技術(shù)
        1.1.1 染色體核型分析技術(shù)
        1.1.2 熒光原位雜交技術(shù)(FISH)
        1.1.3 基因芯片技術(shù)
        1.1.4 測序技術(shù)
        1.1.5 多重連接探針擴(kuò)增(MLPA)技術(shù)
        1.1.6 基于PCR的分子診斷技術(shù)
    1.2 HRM技術(shù)簡介
        1.2.1 HRM技術(shù)的原理
        1.2.2 飽和熒光染料
        1.2.3 HRM分析儀器
        1.2.4 HRM檢測的數(shù)據(jù)分析
    1.3 HRM在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用
        1.3.1 HRM在SNP分型中的應(yīng)用
        1.3.2 HRM在序列匹配中的應(yīng)用
        1.3.3 HRM在突變掃描中的應(yīng)用
        1.3.4 HRM在甲基化檢測中的應(yīng)用
        1.3.5 HRM在微生物檢測中的應(yīng)用
        1.3.6 HRM在CNV檢測中的應(yīng)用
        1.3.7 HRM技術(shù)在串聯(lián)重復(fù)序列分析中的應(yīng)用
    1.4 HRM技術(shù)的分類
        1.4.1 短擴(kuò)增子HRM技術(shù)
        1.4.2 多重HRM技術(shù)
        1.4.3 非標(biāo)記探針和回彈探針HRM技術(shù)
        1.4.4 多色熒光探針HRM技術(shù)
    1.5 本論文研究目的、研究內(nèi)容及創(chuàng)新性
        1.5.1 本論文研究目的
        1.5.2 研究內(nèi)容
        1.5.3 創(chuàng)新性
第二章 基于HRM技術(shù)的7q11.23微缺失/微重復(fù)分析方法的建立
    2.1 前言
    2.2 目標(biāo)基因的選擇、引物設(shè)計與熔解曲線模擬
        2.2.1 實驗部分
        2.2.2 結(jié)果
    2.3 引物特異性的驗證
        2.3.1 實驗部分
        2.3.2 結(jié)果
    2.4 dNTP濃度的優(yōu)化
        2.4.1 實驗部分
        2.4.2 結(jié)果
    2.5 dNTP濃度的確定
        2.5.1 實驗部分
        2.5.2 結(jié)果
    2.6 臨床標(biāo)本檢測
        2.6.1 實驗部分
        2.6.2 結(jié)果
    2.7 基因芯片實驗驗證HRM檢測結(jié)果
        2.7.1 實驗部分
        2.7.2 結(jié)果
    2.8 HRM檢測方法的重復(fù)性驗證
        2.8.1 實驗部分
        2.8.2 結(jié)果
    2.9 標(biāo)本添加量對HRM檢測的影響
        2.9.1 實驗部分
        2.9.2 結(jié)果
    2.10 討論
    2.11 本章小結(jié)
第三章 基于多重HRM的氯吡格雷耐藥基因SNP位點檢測方法的建立
    3.1 前言
    3.2 目標(biāo)SNP位點的引物設(shè)計與HRM曲線模擬
        3.2.1 實驗部分
        3.2.2 結(jié)果
    3.3 引物特異性的驗證
        3.3.1 實驗部分
        3.3.2 結(jié)果
    3.4 針對氯吡格雷耐藥基因的單重HRM檢測方法的建立
        3.4.1 實驗部分
        3.4.2 結(jié)果
    3.5 單重HRM檢測方法的臨床標(biāo)本檢測
        3.5.1 實驗部分
        3.5.2 結(jié)果
    3.6 單重HRM臨床標(biāo)本檢測結(jié)果的Sanger測序驗證
        3.6.1 實驗部分
        3.6.2 結(jié)果
    3.7 多重HRM檢測方法的建立
        3.7.1 實驗部分
        3.7.2 結(jié)果
    3.8 多重HRM實驗結(jié)果的Sanger測序驗證
        3.8.1 實驗部分
        3.8.2 結(jié)果
    3.9 多重HRM檢測方法的重復(fù)性驗證
        3.9.1 實驗部分
        3.9.2 結(jié)果
    3.10 標(biāo)本添加量對多重HRM檢測結(jié)果的影響
        3.10.1 實驗部分
        3.10.2 結(jié)果
    3.11 討論
    3.12 本章小結(jié)
第四章 基于多色探針HRM技術(shù)的喹硫平和阿立哌唑藥物代謝基因位點檢測方法的建立
    4.1 前言
    4.2 目標(biāo)SNP位點的引物及分子信標(biāo)設(shè)計與分子信標(biāo)二級結(jié)構(gòu)模擬
        4.2.1 實驗部分
        4.2.2 結(jié)果
    4.3 引物特異性的驗證
        4.3.1 實驗部分
        4.3.2 結(jié)果
    4.4 單色探針HRM方法的建立
        4.4.1 實驗部分
        4.4.2 結(jié)果
    4.5 多色探針HRM方法的建立
        4.5.1 實驗部分
        4.5.2 結(jié)果
    4.6 多色探針HRM的臨床標(biāo)本檢測
        4.6.1 實驗部分
        4.6.2 結(jié)果
    4.7 多色探針HRM實驗結(jié)果的Sanger測序驗證
        4.7.1 實驗部分
        4.7.2 結(jié)果
    4.8 多色探針HRM檢測方法的重復(fù)性驗證
        4.8.1 實驗部分
        4.8.2 結(jié)果
    4.9 標(biāo)本添加量對多色探針HRM檢測的影響
        4.9.1 實驗部分
        4.9.2 結(jié)果
    4.10 討論
    4.11 本章小結(jié)
第五章 全文總結(jié)
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 前景展望
參考文獻(xiàn)
致謝
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攻讀博士學(xué)位期間申請的發(fā)明專利



本文編號：3764615