背景:高分辨熔解曲線分析(HRM)技術(shù)是一種由熔解曲線技術(shù)為基礎(chǔ)發(fā)展起來的核酸分析技術(shù)。由于該技術(shù)是一種操作簡(jiǎn)單、快速且成本低的核酸分析方法,HRM技術(shù)從其誕生伊始就受到了廣泛的關(guān)注,基于HRM的新型檢測(cè)方法也不斷出現(xiàn)。Williams-Beuren綜合征(WBS)是一種嚴(yán)重且較為常見的多系統(tǒng)缺陷綜合征,7號(hào)染色體長(zhǎng)臂7q11.23區(qū)域的雜合缺失被認(rèn)為是該病的病因,相同區(qū)域的拷貝數(shù)重復(fù)也會(huì)造成多系統(tǒng)的發(fā)育異常。氯吡格雷是一種急性冠脈綜合征和經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)后常用藥物,CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP2C19*17、PON1 Q192R以及ABCB1 C3435T的基因多態(tài)性會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)氯吡格雷低應(yīng)答現(xiàn)象。喹硫平與阿立哌唑是兩種常用的第二代精神藥物,其藥效和副作用分別受到CYP1A2*1F、CYP3A5*3和CYP3A4*1G、ANKK1 Taq1A的影響。目的:利用dNTP限制性PCR和HRM技術(shù)聯(lián)用,建立一種用于檢測(cè)7q11.23區(qū)域微缺失/微重復(fù)的方法;利用5’GC堿基修飾的引物和多重HRM技術(shù),建立一種用于檢測(cè)氯吡格雷精準(zhǔn)用藥相關(guān)的5個(gè)SNP位點(diǎn)的方法;利用多色...

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 分子診斷常用技術(shù)
        1.1.1 染色體核型分析技術(shù)
        1.1.2 熒光原位雜交技術(shù)(FISH)
        1.1.3 基因芯片技術(shù)
        1.1.4 測(cè)序技術(shù)
        1.1.5 多重連接探針擴(kuò)增(MLPA)技術(shù)
        1.1.6 基于PCR的分子診斷技術(shù)
    1.2 HRM技術(shù)簡(jiǎn)介
        1.2.1 HRM技術(shù)的原理
        1.2.2 飽和熒光染料
        1.2.3 HRM分析儀器
        1.2.4 HRM檢測(cè)的數(shù)據(jù)分析
    1.3 HRM在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用
        1.3.1 HRM在SNP分型中的應(yīng)用
        1.3.2 HRM在序列匹配中的應(yīng)用
        1.3.3 HRM在突變掃描中的應(yīng)用
        1.3.4 HRM在甲基化檢測(cè)中的應(yīng)用
        1.3.5 HRM在微生物檢測(cè)中的應(yīng)用
        1.3.6 HRM在CNV檢測(cè)中的應(yīng)用
        1.3.7 HRM技術(shù)在串聯(lián)重復(fù)序列分析中的應(yīng)用
    1.4 HRM技術(shù)的分類
        1.4.1 短擴(kuò)增子HRM技術(shù)
        1.4.2 多重HRM技術(shù)
        1.4.3 非標(biāo)記探針和回彈探針HRM技術(shù)
        1.4.4 多色熒光探針HRM技術(shù)
    1.5 本論文研究目的、研究?jī)?nèi)容及創(chuàng)新性
        1.5.1 本論文研究目的
        1.5.2 研究?jī)?nèi)容
        1.5.3 創(chuàng)新性
第二章 基于HRM技術(shù)的7q11.23微缺失/微重復(fù)分析方法的建立
    2.1 前言
    2.2 目標(biāo)基因的選擇、引物設(shè)計(jì)與熔解曲線模擬
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.2 結(jié)果
    2.3 引物特異性的驗(yàn)證
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)部分
        2.3.2 結(jié)果
    2.4 dNTP濃度的優(yōu)化
        2.4.1 實(shí)驗(yàn)部分
        2.4.2 結(jié)果
    2.5 dNTP濃度的確定
        2.5.1 實(shí)驗(yàn)部分
        2.5.2 結(jié)果
    2.6 臨床標(biāo)本檢測(cè)
        2.6.1 實(shí)驗(yàn)部分
        2.6.2 結(jié)果
    2.7 基因芯片實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證HRM檢測(cè)結(jié)果
        2.7.1 實(shí)驗(yàn)部分
        2.7.2 結(jié)果
    2.8 HRM檢測(cè)方法的重復(fù)性驗(yàn)證
        2.8.1 實(shí)驗(yàn)部分
        2.8.2 結(jié)果
    2.9 標(biāo)本添加量對(duì)HRM檢測(cè)的影響
        2.9.1 實(shí)驗(yàn)部分
        2.9.2 結(jié)果
    2.10 討論
    2.11 本章小結(jié)
第三章 基于多重HRM的氯吡格雷耐藥基因SNP位點(diǎn)檢測(cè)方法的建立
    3.1 前言
    3.2 目標(biāo)SNP位點(diǎn)的引物設(shè)計(jì)與HRM曲線模擬
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.2 結(jié)果
    3.3 引物特異性的驗(yàn)證
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)部分
        3.3.2 結(jié)果
    3.4 針對(duì)氯吡格雷耐藥基因的單重HRM檢測(cè)方法的建立
        3.4.1 實(shí)驗(yàn)部分
        3.4.2 結(jié)果
    3.5 單重HRM檢測(cè)方法的臨床標(biāo)本檢測(cè)
        3.5.1 實(shí)驗(yàn)部分
        3.5.2 結(jié)果
    3.6 單重HRM臨床標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果的Sanger測(cè)序驗(yàn)證
        3.6.1 實(shí)驗(yàn)部分
        3.6.2 結(jié)果
    3.7 多重HRM檢測(cè)方法的建立
        3.7.1 實(shí)驗(yàn)部分
        3.7.2 結(jié)果
    3.8 多重HRM實(shí)驗(yàn)結(jié)果的Sanger測(cè)序驗(yàn)證
        3.8.1 實(shí)驗(yàn)部分
        3.8.2 結(jié)果
    3.9 多重HRM檢測(cè)方法的重復(fù)性驗(yàn)證
        3.9.1 實(shí)驗(yàn)部分
        3.9.2 結(jié)果
    3.10 標(biāo)本添加量對(duì)多重HRM檢測(cè)結(jié)果的影響
        3.10.1 實(shí)驗(yàn)部分
        3.10.2 結(jié)果
    3.11 討論
    3.12 本章小結(jié)
第四章 基于多色探針HRM技術(shù)的喹硫平和阿立哌唑藥物代謝基因位點(diǎn)檢測(cè)方法的建立
    4.1 前言
    4.2 目標(biāo)SNP位點(diǎn)的引物及分子信標(biāo)設(shè)計(jì)與分子信標(biāo)二級(jí)結(jié)構(gòu)模擬
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.2 結(jié)果
    4.3 引物特異性的驗(yàn)證
        4.3.1 實(shí)驗(yàn)部分
        4.3.2 結(jié)果
    4.4 單色探針HRM方法的建立
        4.4.1 實(shí)驗(yàn)部分
        4.4.2 結(jié)果
    4.5 多色探針HRM方法的建立
        4.5.1 實(shí)驗(yàn)部分
        4.5.2 結(jié)果
    4.6 多色探針HRM的臨床標(biāo)本檢測(cè)
        4.6.1 實(shí)驗(yàn)部分
        4.6.2 結(jié)果
    4.7 多色探針HRM實(shí)驗(yàn)結(jié)果的Sanger測(cè)序驗(yàn)證
        4.7.1 實(shí)驗(yàn)部分
        4.7.2 結(jié)果
    4.8 多色探針HRM檢測(cè)方法的重復(fù)性驗(yàn)證
        4.8.1 實(shí)驗(yàn)部分
        4.8.2 結(jié)果
    4.9 標(biāo)本添加量對(duì)多色探針HRM檢測(cè)的影響
        4.9.1 實(shí)驗(yàn)部分
        4.9.2 結(jié)果
    4.10 討論
    4.11 本章小結(jié)
第五章 全文總結(jié)
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 前景展望
參考文獻(xiàn)
致謝
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攻讀博士學(xué)位期間申請(qǐng)的發(fā)明專利



本文編號(hào)：3764615