本文關(guān)鍵詞：人工蠶絲韌帶復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)前交叉韌帶損傷的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 人工蠶絲韌帶（Artificial silk ligament）作為生物材料支架，具有良好的生物相容性，沒(méi)有細(xì)胞毒性，并不引起炎性反應(yīng)，在組織工程已被廣泛應(yīng)用。蠶絲脫膠后，經(jīng)多種方法增大人工蠶絲韌帶的孔隙率，提高其與外周事物接觸的表面積，進(jìn)而增加骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）在蠶絲韌帶上的粘附率。通過(guò)一定濃度骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在人工蠶絲蠶絲韌帶上貼附生長(zhǎng)，制成復(fù)合生物材料，替代新西蘭大白兔的前交叉韌帶（ACL），在膝關(guān)節(jié)微環(huán)境和動(dòng)力作用下，觀察復(fù)合材料的轉(zhuǎn)變，并與正常韌帶做對(duì)比。為人工肌腱和韌帶等組織工程材料的制作提供一定的可行性。 方法 1.實(shí)驗(yàn)流程 1.1制作人工蠶絲韌帶，用胰酶或碳酸鈉進(jìn)行脫膠，然后與Ⅰ型膠原蛋白復(fù)合，進(jìn)行冷凍干燥，再以EDC（1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺）/NHS（N-羥基琥珀酰亞胺）作為交聯(lián)試劑進(jìn)行膠原的交聯(lián)，再次冷凍干燥，環(huán)氧乙烷滅菌備用。 1.2選取約一周左右新西蘭小白兔，取其骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，傳代培養(yǎng)并行流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞種類。取第四代細(xì)胞，與備用的人工蠶絲韌帶復(fù)合7天，形成復(fù)合材料。 1.3封閉群養(yǎng)新西蘭大白兔36只，隨機(jī)分為3組（空白組，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組），每組12只。在相同條件下分別去除其前交叉韌帶，保留殘端。在實(shí)驗(yàn)組中，用復(fù)合材料重建ACL。 2.觀察指標(biāo) 2.1不同預(yù)定時(shí)間各組分別隨機(jī)處死4只動(dòng)物，觀察復(fù)合材料組織學(xué)、病理學(xué)形態(tài)變化及骨與復(fù)合材料連接接口的組織結(jié)構(gòu)。 2.2不同預(yù)定時(shí)間隨機(jī)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影像學(xué)和生物力學(xué)檢察。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS軟件，行配對(duì)t檢驗(yàn)、單樣本t檢驗(yàn)、2×4析因分析，統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果 1.人工蠶絲韌帶的孔隙率 蠶絲韌帶表面因?yàn)榻z膠的存在，把絲素纖維緊緊包裹住粘合在一起組成完整的蠶絲，使得絲素表面粗糙不平，但能夠看到單根的絲素纖維；脫膠后，絲素表面因絲膠的去除而很光滑，可見(jiàn)一單根的絲素纖維。脫膠后人工蠶絲韌帶與膠原復(fù)合，在其表面形成了一層膠原層，結(jié)構(gòu)很不均勻，表面積增大，使得蠶絲韌帶表面變得粗糙不平，孔隙率提高，促進(jìn)了BMSCs的貼附。 2.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng) 一周大小新西蘭小白兔處死后，立即取其四肢干骺端髓腔細(xì)胞培養(yǎng)。48小時(shí)后初次換液，用PBS緩沖液輕輕沖洗，去除雜細(xì)胞，凈化BMSCs，倒置顯微鏡下觀察，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，呈不規(guī)則梭形。取部分細(xì)胞制成懸液后進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)，結(jié)果為CD34+細(xì)胞占10%左右，，CD44+占42%左右,表現(xiàn)為干細(xì)胞特性（貼壁培養(yǎng)法：CD34陰性，CD44、CD50、STRO-1陽(yáng)性）。 3.移植物指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)組移植物周圍被大量軟組織包繞，有少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。與骨接口連接處有Sharpey結(jié)構(gòu)產(chǎn)生，骨細(xì)胞生長(zhǎng)比較旺盛。ACL殘端包繞的移植物，病理切片顯示結(jié)構(gòu)接近正ACL。而對(duì)照組除有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)外，無(wú)其它相應(yīng)表現(xiàn)，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論 1.Ⅰ型膠原蛋白與蠶絲韌帶復(fù)合后可增加韌帶的表面積，提高孔隙率，促進(jìn)BMSCs的貼附。 2.人工蠶絲韌帶與BMSCs復(fù)合后可促進(jìn)韌帶與骨的愈合，并在膝關(guān)節(jié)微環(huán)境下有向正常韌帶組織轉(zhuǎn)化的跡象。
【關(guān)鍵詞】：人工蠶絲韌帶 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 前交叉韌帶 膠原
【學(xué)位授予單位】：泰山醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 符號(hào)說(shuō)明9-10
• 前言10-15
• 材料與方法15-24
• 結(jié)果24-28
• 討論28-36
• 結(jié)論36-37
• 附圖表37-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 綜述48-54
• 致謝54

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：人工蠶絲韌帶復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)前交叉韌帶損傷的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：376456