發(fā)布時(shí)間：2023-03-12 19:36

　　臨床骨修復(fù)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中臨界骨缺損以及長(zhǎng)期骨不連始終一個(gè)嚴(yán)峻的課題,其中的主要難題是目前采用的骨移植物大多缺乏生物活性。骨組織工程中活性骨移植物的構(gòu)建通常需要結(jié)合可降解生物材料、種子細(xì)胞和生長(zhǎng)因子。合成高分子材料聚丙交酯-乙交酯(PLGA)與無(wú)機(jī)粒子納米羥基磷灰石(HA)組成的復(fù)合材料因?yàn)榫哂辛己玫牧W(xué)性能、可降解性和生物相容性等被廣泛用于臨床骨修復(fù)治療。該復(fù)合材料雖然可以在一定程度上促進(jìn)骨缺損的修復(fù),但其并不具有生物活性。因此,利用生物活性分子(如生長(zhǎng)因子)對(duì)移植物表面改性對(duì)于骨再生與修復(fù)具有重要意義。骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(Bone morphogenetic protein 2,BMP2)在骨骼愈合和重建過程中發(fā)揮重要作用,但其在體內(nèi)不穩(wěn)定、半衰期短且容易降解失活導(dǎo)致其作用效果被限制。因此,如何將其有效地固定于骨移植材料表面以延長(zhǎng)或保持其生物活性成為近年來(lái)研究的重要課題。來(lái)源于海洋貽貝類的水下粘附蛋白具有廣泛粘附性,能夠粘附在聚合物、金屬和陶瓷等多種材料表面,其主要成分為左旋多巴(3,4-dihydroxylphenylalanine,DOPA),因此,將BMP2與DOPA整合,制備出具有...

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
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第1章 緒論
    1.1 骨缺損及修復(fù)
    1.2 骨組織工程
        1.2.1 骨組織工程生物支架材料
        1.2.2 骨組織工程種子細(xì)胞
        1.2.3 骨組織工程生長(zhǎng)因子
    1.3 骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(BMP2)研究現(xiàn)狀及應(yīng)用
        1.3.1 BMP的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 BMP的來(lái)源及發(fā)展
        1.3.3 BMP2 的生物學(xué)作用
        1.3.4 BMP2 的臨床應(yīng)用及并發(fā)癥
    1.4 聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)研究現(xiàn)狀及其應(yīng)用
        1.4.1 PLGA的性質(zhì)
        1.4.2 PLGA的應(yīng)用
    1.5 納米羥基磷灰石(HA)的性質(zhì)及應(yīng)用
    1.6 產(chǎn)業(yè)、產(chǎn)品及市場(chǎng)對(duì)該項(xiàng)目的技術(shù)需求
    1.7 相關(guān)技術(shù)國(guó)內(nèi)外發(fā)展現(xiàn)狀與趨勢(shì)
    1.8 立題依據(jù)與設(shè)計(jì)思路
第2章 rhBMP2-LPETG的表達(dá)與純化
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑及材料
        2.1.3 質(zhì)粒及BL21 感受態(tài)細(xì)胞
        2.1.4 試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 rhBMP2 及rhBMP2-LPETG重組質(zhì)粒載體的構(gòu)建
        2.2.2 rhBMP2 及rhBMP2-LPETG在大腸桿菌中的表達(dá)、純化及復(fù)性
        2.2.3 rhBMP2 及rhBMP2-LPETG濃度的SDS-PAGE檢測(cè)
        2.2.4 rhBMP2 及rhBMP2-LPETG的圓二色譜分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 rhBMP2 及rhBMP2-LPETG基因載體的構(gòu)建
        2.3.2 rhBMP2 及rhBMP2-LPETG在大腸桿菌中的表達(dá)、純化及復(fù)性
        2.3.3 rhBMP2 及rhBMP2-LPETG的SDS-PAGE檢測(cè)
        2.3.4 rhBMP2 及rhBMP2-LPETG的圓二色譜分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA復(fù)合膜的制備及表征
    3.1 材料
        3.1.1 主要儀器和設(shè)備
        3.1.2 原料和試劑
        3.1.3 溶液配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 硅化玻片
        3.2.2 PLGA/HA復(fù)合膜的制備
        3.2.3 PLGA膜的制備
        3.2.4 PLGA/HA復(fù)合膜的DOPA-BMP2 修飾
        3.2.5 DOPA-BMP2 修飾的PLGA膜的傅里葉紅外光譜分析
        3.2.6 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA復(fù)合膜的親水性分析
        3.2.7 多肽修飾后的PLGA/HA復(fù)合膜對(duì)BMP2 的綁定效率
        3.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 硅化玻片
        3.3.2 PLGA/HA復(fù)合膜的制備
        3.3.3 PLGA膜的制備
        3.3.4 材料表面的蛋白粘附
        3.3.5 DOPA-BMP2 修飾的PLGA膜的傅里葉紅外光譜分析
        3.3.6 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA復(fù)合膜的親水性分析
        3.3.7 多肽修飾后的PLGA/HA復(fù)合膜對(duì)BMP2 的綁定效率
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA復(fù)合膜對(duì)MC3T3-E1 細(xì)胞的生物學(xué)研究
    4.1 材料
        4.1.1 主要儀器和設(shè)備
        4.1.2 原料和試劑
        4.1.3 細(xì)胞系
        4.1.4 溶液配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 MC3T3-E1 細(xì)胞及材料準(zhǔn)備
        4.2.2 rhBMP2 及rhBMP2-LPETG對(duì)MC3T3-E1 細(xì)胞增殖的影響
        4.2.3 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA復(fù)合膜對(duì)MC3T3-E1 細(xì)胞堿性磷酸酶合成的影響
        4.2.4 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA復(fù)合膜對(duì)MC3T3-E1 細(xì)胞粘附的影響
        4.2.5 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA膜對(duì)MC3T3-E1 細(xì)胞成骨相關(guān)基因表達(dá)的影響
        4.2.6 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA膜對(duì)MC3T3-E1 細(xì)胞成骨相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        4.2.7 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA膜對(duì)MC3T3-E1 細(xì)胞鈣沉積的影響
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 rhBMP2 及rhBMP2-LPETG對(duì)MC3T3-E1 細(xì)胞增殖的影響
        4.3.2 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA復(fù)合膜對(duì)MC3T3-E1 細(xì)胞堿性磷酸酶合成的影響
        4.3.3 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA復(fù)合膜對(duì)MC3T3-E1 細(xì)胞粘附的影響
        4.3.4 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA膜對(duì)MC3T3-E1 細(xì)胞成骨相關(guān)mRNA表達(dá)水平的影響
        4.3.5 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA膜對(duì)MC3T3-E1 細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響
        4.3.6 DOPA-BMP2 修飾的PLGA/HA膜對(duì)MC3T3-E1 細(xì)胞鈣沉積的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及攻讀碩士期間所取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3761824