發(fā)布時間：2023-03-04 20:18

　　目的:探究基于3D打印技術(shù)制備復合甲基丙烯酸酯明膠(gel),海藻酸鈉(alg)和透明質(zhì)酸(Ha)水凝膠材料支架的可能性。篩選并制備具有一定力學性能和辨析度高的支架。研究其體外誘導骨髓間充質(zhì)干細胞成軟骨分化的能力。方法:第一部分,基于3D打印技術(shù)制備水凝膠支架。先將海藻酸鈉和透明質(zhì)酸使用聚乙二醇二縮水甘油醚(PEGDG)作為交聯(lián)劑進行物理交聯(lián),再以不同的比例與gel混合得到gel/alg-Ha復合水凝膠,最后使用3D打印技術(shù)制備支架。測量拉伸強度和抗壓強度,驗證支架的力學性能;測定溶脹率和吸水率,驗證支架的吸水性能;測定體外降解率,驗證支架的降解性能。第二部分,驗證支架體外誘導骨髓間充質(zhì)干細胞成軟骨分化的研究。根據(jù)含4%、6%、8%(g/ml)的alg-Ha不同濃度設(shè)置gel+(alg+Ha)4,gel+(alg+Ha)6,gel+(alg+Ha)8組作為實驗組,以單純的gel組,gel+alg組和alg+Ha組為對照組,提取兔骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)體外擴增培養(yǎng)后,接種到各個實驗組和對照組上。培養(yǎng)7天后,用掃描電子顯微鏡(SEM)觀察細胞和支架的粘附形態(tài),使用鈣黃綠素/碘化丙啶染色檢測支架...

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
引言
第一部分 基于3D打印技術(shù)制備甲基丙烯酸酯明膠/海藻酸鈉/透明質(zhì)酸水凝膠支架
    前言
    1 實驗材料和方法
        1.1 實驗儀器
        1.2 實驗材料與試劑
    2 實驗方法
        2.1 甲基丙烯酸酯明膠的合成
        2.2 制備物理交聯(lián)后的海藻酸鈉和透明質(zhì)酸水凝膠支架。
        2.3 3D打印復合gelMA/alg/HA水凝膠支架
            2.3.1 預制打印支架的生物墨水
            2.3.2 支架的制備
        2.4 3D打印支架的測試與表征
            2.4.1 不同支架的外貌觀察
            2.4.2 不同支架的溶脹率和吸水率檢測
            2.4.3 不同支架的力學性能檢測
            2.4.4 不同支架的體外降解性能檢測
        2.5 統(tǒng)計分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 甲基丙烯酸酯明膠的合成
        3.2 各組支架的外貌表觀圖
        3.3 各組支架的溶脹率和吸水率的檢測結(jié)果
        3.4 各組支架的抗壓強度和拉伸強度的檢測結(jié)果
        3.5 各組支架的體外降解實驗的檢測結(jié)果
    4 討論和階段小結(jié)
第二部分 復合甲基丙烯酸酯明膠/海藻酸鈉/透明質(zhì)酸水凝膠支架體外誘導間充質(zhì)干細胞成軟骨分化研究
    前言
    1 實驗的儀器和材料
        1.1 實驗主要儀器
        1.2 實驗材料與試劑
        1.3 實驗動物
    2 實驗的方法
        2.1 實驗試劑的配制
        2.2 實驗分組
        2.3 兔骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSC)提取與培養(yǎng)
        2.4 各組支架用于兔骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)實驗
        2.5 支架上的細胞DNA檢測
        2.6 支架上的糖胺聚糖GAG含量檢測
        2.7 鈣黃綠素/PI熒光染色用于活死細胞的檢測
        2.8 掃描電鏡(SEM)觀察
        2.9 蘇木精-伊紅(HE)染色
        2.10 二型膠原的免疫組化染色
        2.11 Qrt-PCR檢測軟骨相關(guān)特征性基因的表達情況
    3 統(tǒng)計學分析
    4 實驗結(jié)果
        4.1 各組支架上的細胞DNA的增殖情況
        4.2 各組支架上的鈣黃綠素/PI熒光活死細胞染色情況
        4.3 掃描電子顯微鏡(SEM)檢測結(jié)果
        4.4 糖胺聚糖(GAG)的分泌量的檢測結(jié)果
        4.5 蘇木素-伊紅(HE)染色的檢測結(jié)果
        4.6 二型膠原的免疫組化染色的檢測結(jié)果
        4.7 熒光定量PCR檢測軟骨相關(guān)基因表達情況的檢測結(jié)果
    5 階段討論
    6 全文討論與總結(jié)
        6.1 骨髓間充質(zhì)干細胞與關(guān)節(jié)軟骨的關(guān)系
        6.2 骨性關(guān)節(jié)炎和軟骨缺損的認識
        6.3 軟骨組織工程技術(shù)在軟骨損傷修復中的應用
        6.4 3D打印技術(shù)在軟骨組織工程的應用
        6.5 總結(jié)與展望
            6.5.1 全文總結(jié)與創(chuàng)新
            6.5.2 研究的展望
參考文獻
縮寫詞表
綜述
    參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3754936