目的:1、比較骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(BMP2)和BMP7和化學(xué)誘導(dǎo)配方(地塞米松、抗壞血酸和β-甘油磷酸鈉)誘導(dǎo)MC3T3-E1細(xì)胞成骨分化的能力,為下一步實(shí)驗(yàn)中緩釋材料負(fù)載因子的選取提供依據(jù)。2、雖然BMPs在許多臨床應(yīng)用中被用來促進(jìn)骨形成,但是,BMPs在體內(nèi)固有的不穩(wěn)定,因此需要與載體結(jié)合進(jìn)行控制性遞送。本研究開發(fā)了一種新型高效的纖維蛋白膠/纖維粘連蛋白/肝素(FG/Fn/Hep)為載體的BMP2緩釋體系,用于骨缺損修復(fù)。研究方法:1、在比較BMP2、BMP7和化學(xué)配方的成骨誘導(dǎo)效果的實(shí)驗(yàn)中,通過茜素紅染色鈣結(jié)節(jié),定量檢測堿性磷酸酶(ALP),免疫組化和ELISA檢測RUNT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子-2(RUNX-2)、骨橋蛋白(OPN)和骨鈣素(OCN)的表達(dá)來評價(jià)成骨誘導(dǎo)效果。2、在制備新型的FG/Fn/Hep-BMP2緩釋體系并評價(jià)其骨修復(fù)性能的實(shí)驗(yàn)中,設(shè)計(jì)纖維蛋白膠作為組織修復(fù)細(xì)胞浸潤的臨時(shí)支架,纖維粘連蛋白為細(xì)胞提供粘附位點(diǎn),并作為纖維蛋白和肝素之間的連接器,肝素作為控制釋放BMP2和防止BMP2被體內(nèi)蛋白酶降解的儲存庫。通過體外釋放實(shí)驗(yàn)檢測緩釋體系釋放BMP2情況。通過MC3T3-E...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 MC3T3-E1細(xì)胞誘導(dǎo)成骨的方法學(xué)比較與分析
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑
        2.2 主要儀器
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 化學(xué)配方與BMP2和BMP7 誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞
            2.3.2 礦化測定
            2.3.3 堿性磷酸酶測定
            2.3.4 免疫細(xì)胞化學(xué)染色
            2.3.5 免疫組化半定量
            2.3.6 RUNX-2、OPN和 OCN的 ELISA檢測
            2.3.7 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 MC3T3-E1細(xì)胞培養(yǎng)的礦化分析
        3.2 堿性磷酸酶的定量檢測
        3.3 免疫細(xì)胞化學(xué)
            3.3.1免疫細(xì)胞化學(xué)檢測RUNX-2
            3.3.2 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測OPN
            3.3.3 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測OCN
            3.3.4 免疫細(xì)胞化學(xué)半定量分析 RUNX-2、 OPN 和 OCN
        3.4 ELISA 檢測 RUNX-2、OPN 和 OCN
    4 討論
    5 小結(jié)
第二部分 纖維蛋白膠/纖維粘連蛋白/肝素為基礎(chǔ)的BMP2 緩釋系統(tǒng)誘導(dǎo)MC3T3-E1細(xì)胞成骨及大鼠顱骨臨界缺損成骨
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑
        2.2 主要儀器
        2.3 FG/Fn/Hep-BMP2水凝膠的制備
        2.4 用掃描電鏡觀察水凝膠的微觀結(jié)構(gòu)
        2.5 水凝膠力學(xué)性能的流變分析
        2.6 水凝膠體外釋放BMP2曲線
        2.7 體外成骨實(shí)驗(yàn)的方案設(shè)計(jì)
        2.8 RUNX-2、OPN、OCN和 COL-Ⅰ的q RT-PCR檢測… …… … …… ……
        2.9 動物與外科手術(shù)
        2.10 大鼠顱骨的放射學(xué)檢查
        2.11 大鼠顱骨缺損修復(fù)的組織學(xué)評價(jià)
        2.12 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 三種水凝膠的力學(xué)性能及結(jié)構(gòu)觀察
        3.2 BMP2體外釋放曲線
        3.3 FG/Fn-BMP2 誘導(dǎo)MC3T3-E1 細(xì)胞體外成骨
        3.4 MC3T3-E1細(xì)胞培養(yǎng)的礦化分析
        3.5 堿性磷酸酶定量分析
        3.6 RUNX-2、OPN和 OCN的免疫細(xì)胞化學(xué)研究… … … …… …… … …
        3.7 RUNX-2、OPN、OCN and COL-Ⅰ的ELISA檢測
        3.8 RUNX-2、OPN、OCN and COL-Ⅰ的q RT-PCR… … … … …… … …
        3.9 大鼠顱骨的放射學(xué)檢查
        3.10 大鼠顱骨缺損修復(fù)的組織學(xué)評價(jià)
    4 討論
    5 小結(jié)
本研究創(chuàng)新性的自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡介



本文編號：3738820