目的:評(píng)估新型小分子化合物Kartogenin（KGN）在體外二維培養(yǎng)環(huán)境下對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的誘導(dǎo)作用;制備、優(yōu)化羧甲基殼聚糖/氧化海藻酸鈉自交聯(lián)自愈合水凝膠,研究此水凝膠應(yīng)用于軟骨組織工程支架領(lǐng)域的可行性;探討KGN在水凝膠三維培養(yǎng)環(huán)境中誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化效果。方法:1.采用細(xì)胞球團(tuán)培養(yǎng)法評(píng)估KGN誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化效果。首先,從人臍帶Wharton膠內(nèi)提取人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,通過(guò)細(xì)胞流式鑒定細(xì)胞性質(zhì)。將人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)重懸離心成細(xì)胞團(tuán)塊,采用不同組份的成軟骨誘導(dǎo)液（KGN為實(shí)驗(yàn)組,TGF-β3為陽(yáng)性對(duì)照組,DMSO為空白對(duì)照組,KGN與TGF-β3聯(lián)合應(yīng)用組〈TK組〉）,分別誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞21天后,通過(guò)HE和AB組織學(xué)定性染色,軟骨蛋白和膠原的免疫熒光染色以及成軟骨相關(guān)基因RT-PCR檢測(cè),分析KGN對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的成軟骨誘導(dǎo)分化作用。2.利用羧甲基殼聚糖內(nèi)的氨基與氧化海藻酸鈉內(nèi)的醛基所發(fā)生的席夫堿反應(yīng),以不同交聯(lián)比例制備水凝膠,通過(guò)掃描電鏡、凝膠流變分析、體外溶脹率和降解率檢測(cè)、軟骨粘附性測(cè)試等方法評(píng)估不同交聯(lián)度水... 

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、體外二維培養(yǎng)環(huán)境評(píng)估KGN誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化效果
    1.1 對(duì)象和方法
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑和設(shè)備
        1.1.2 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及體外擴(kuò)增
        1.1.3 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的流式細(xì)胞學(xué)分析
        1.1.4 體外誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化
        1.1.5 不同組份軟骨誘導(dǎo)液對(duì)對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖影響
        1.1.6 軟骨細(xì)胞球團(tuán)的組織學(xué)和免疫組化分析
        1.1.7 細(xì)胞球的RT-PCR檢測(cè)軟骨分化相關(guān)分析
        1.1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 誘導(dǎo)后的軟骨球團(tuán)和人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的大體觀察
        1.2.2 不同組份軟骨培養(yǎng)液對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響
        1.2.3 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的流式分析結(jié)果
        1.2.4 誘導(dǎo)后軟骨球的組織化學(xué)和免疫組化分析
        1.2.5 成軟骨相關(guān)基因的RT-PCR表達(dá)量分析
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、自交聯(lián)自愈合軟骨組織工程水凝膠支架的制備及表征
    2.1 對(duì)象和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備
        2.1.2 水凝膠的制備
        2.1.3 水凝膠的流變學(xué)分析
        2.1.4 水凝膠的掃描電鏡觀察
        2.1.5 水凝膠與軟骨組織的粘附拉力測(cè)試
        2.1.6 水凝膠的溶脹度
        2.1.7 水凝膠的體外降解實(shí)驗(yàn)
        2.1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 水凝膠的成膠效果和凝膠粘附狀態(tài)
        2.2.2 水凝膠的微觀形態(tài)觀察
        2.2.3 水凝膠的流變學(xué)分析
        2.2.4 水凝膠與軟骨組織的粘附拉力分析
        2.2.5 水凝膠的溶脹率分析
        2.2.6 水凝膠的降解率分析
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
三、體外三維培養(yǎng)環(huán)境評(píng)估KGN誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的成軟骨分化效果
    3.1 對(duì)象和方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑和設(shè)備
        3.1.2 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及體外擴(kuò)增
        3.1.3 自交聯(lián)自愈合水凝膠的生物相容性評(píng)價(jià)
        3.1.4 評(píng)價(jià)細(xì)胞-水凝膠復(fù)合體的成軟骨誘導(dǎo)效果
        3.1.5 RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞-凝膠復(fù)合體的軟骨分化相關(guān)基因表達(dá)
        3.1.6 誘導(dǎo)后細(xì)胞-支架復(fù)合體的蛋白多糖和Ⅱ型膠原定量檢測(cè)
        3.1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 自交聯(lián)自愈合水凝膠的生物相容性評(píng)估
        3.2.2 KGN誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在三維水凝膠內(nèi)的成軟骨分化效果
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明
綜述 顳下頜關(guān)節(jié)盤(pán)和髁突組織工程研究現(xiàn)狀和進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3730687