本文關(guān)鍵詞：基于3D打印技術(shù)的新型電紡聚偏二氟乙烯材質(zhì)補(bǔ)片體外細(xì)胞毒性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 1.評(píng)價(jià)基于3D打印技術(shù)的電紡工藝制成的聚偏二氟乙烯（polyvinylidenefluoride，PVDF）材質(zhì)盆底補(bǔ)片對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞(L929細(xì)胞）的細(xì)胞毒性，并與聚丙烯（polypropylene，PP）網(wǎng)片的細(xì)胞毒性進(jìn)行比較。 2.建立從人陰道壁組織分離人陰道上皮細(xì)胞(hunman vaginal epithelial cells，hVECs)及其體外培養(yǎng)方法，并對(duì)其體外生物學(xué)特性進(jìn)行研究。用hVECs對(duì)電紡絲工藝制成的PVDF材質(zhì)盆底補(bǔ)片的細(xì)胞毒性進(jìn)行研究。 材料與方法 1.依據(jù)ISO10993的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)采用L929細(xì)胞進(jìn)行電紡PVDF材質(zhì)補(bǔ)片的細(xì)胞毒性研究。實(shí)驗(yàn)分為A組（空白對(duì)照組，完全培養(yǎng)基），B組（乳膠手套浸提液,陽(yáng)性對(duì)照組），C組（聚丙烯材料浸提液,陰性對(duì)照組），D組（PVDF材料浸提液組）4組。(1)評(píng)價(jià)細(xì)胞形態(tài)學(xué)及代謝特性：用四組材料浸提液分別培養(yǎng)L929細(xì)胞24h、48h、72h，倒置相差顯微鏡觀察L929細(xì)胞形態(tài)；四唑化合物MTS比色法測(cè)定各組吸光度值，并計(jì)算相對(duì)增值率（relative growth rate，RGR）進(jìn)行毒性分級(jí)。(2)評(píng)價(jià)細(xì)胞凋亡：用A組、B組、C組、D組培養(yǎng)基培養(yǎng)L929細(xì)胞72h后，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞凋亡獲得各組正常細(xì)胞及晚期凋亡、壞死細(xì)胞比率。(3)評(píng)價(jià)細(xì)胞相容性：將L929細(xì)胞種植于PVDF膜片上，掃描電鏡觀察培養(yǎng)1天、3天、7天時(shí)L929細(xì)胞生長(zhǎng)情況。 2.取因盆腔器官脫垂行陰道前后壁修補(bǔ)患者的陰道前壁組織，II型中性蛋白酶4℃過(guò)夜消化陰道組織后分離上皮層和固有層，上皮層用胰酶進(jìn)一步消化成細(xì)胞懸液接種到角化細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（K-SFM）。顯微鏡下觀察hVECs形態(tài)及增值特征；取第1代hVECs測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；通過(guò)角蛋白免疫染色對(duì)hVECs進(jìn)行鑒定。依據(jù)ISO10993的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行電紡PVDF補(bǔ)片對(duì)VECs細(xì)胞毒性的實(shí)驗(yàn)。顯微鏡觀察hVECs與四組材料浸提液共培養(yǎng)24h、48h、72h各時(shí)相點(diǎn)的形態(tài)學(xué)變化；MTS比色法檢測(cè)四組吸光度值，據(jù)此計(jì)算RGR并進(jìn)行毒性分級(jí)。流式細(xì)胞儀測(cè)定A、B、C、D組細(xì)胞中正常存活細(xì)胞及晚期凋亡加壞死細(xì)胞所占百分比。將hVECs種植于PVDF膜片上，掃描電鏡觀察在第1天、第3天及第7天時(shí)細(xì)胞在材料上的生長(zhǎng)情況。 結(jié)果 1.在24h、48h、72h三個(gè)時(shí)相點(diǎn)A組、C組、D組L929細(xì)胞形狀、貼壁狀態(tài)、及增殖情況基本一致，見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)正常，呈梭形或不規(guī)則三角形，貼壁生長(zhǎng)良好；B組見(jiàn)大量死細(xì)胞和細(xì)胞碎裂，細(xì)胞層幾乎完全破壞，B組對(duì)L929細(xì)胞呈現(xiàn)重度毒性。通過(guò)MTS測(cè)定四組細(xì)胞在三個(gè)時(shí)間的吸光度：與A組細(xì)胞比較，C組、D組細(xì)胞毒性分級(jí)為0級(jí)和0~1級(jí)，B組細(xì)胞細(xì)胞毒性分級(jí)為4級(jí)；A、C、D組3組吸光度值兩兩進(jìn)行比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），A、C、D組3組分別與B組吸光度值比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）。72h時(shí)各組細(xì)胞凋亡結(jié)果：A組、B組、C組及D組細(xì)胞存活細(xì)胞的比率分別（92.43±1.24）%、（3.66±0.25）%、（92.23±0.64）%和（92.8±0.89）%，晚期凋亡加壞死細(xì)胞比率為（4.32±1.14）%、（95.06±1.33）%、（3.57±1.15）%、（3.85±1.08）%，A、C、D組兩兩進(jìn)行比較，，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），A、C、D組與B組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）。掃描電鏡提示隨著L929細(xì)胞在PVDF材料種植時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞逐漸增多并向材料的纖維空隙向深層張入。 2.原代陰道上皮細(xì)胞接種24h左右細(xì)胞開(kāi)始貼壁，4天后細(xì)胞生長(zhǎng)加快，一般原代細(xì)胞7~10天可完成傳代。傳代后hVECs24h可基本完成貼壁，5~7天可進(jìn)行傳代。hVECs呈多角形，形態(tài)大小均一，折光性較好。hVECs5代后逐漸老化。使用角蛋白免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性。 3.在24h、48h、72h三個(gè)時(shí)相點(diǎn)A組、C組、D組陰道上皮細(xì)胞細(xì)胞形狀、貼壁狀態(tài)、及生長(zhǎng)情況基本一致，見(jiàn)細(xì)胞大小均一，細(xì)胞呈多角形，貼壁生長(zhǎng)良好；B組見(jiàn)大量死細(xì)胞和細(xì)胞碎裂，基本未見(jiàn)到貼壁細(xì)胞，細(xì)胞層完全破壞。通過(guò)MTS測(cè)定四組細(xì)胞在三個(gè)時(shí)間的吸光度：與A組細(xì)胞比較，C組、D組細(xì)胞毒性分級(jí)為1級(jí)及0~1級(jí)，B組細(xì)胞細(xì)胞毒性分級(jí)為4級(jí)；A、C、D組3組吸光度值組間比較無(wú)顯著性差異，3組分別與B組吸光度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）。流式細(xì)胞儀測(cè)定72h4組細(xì)胞凋亡情況提示：各組細(xì)胞存活細(xì)胞的比率分別為（78.73±3.00）%、（6.8±2.14）%、（76.57±5.86）%、（78.43±2.35）%，A、C、D組兩兩進(jìn)行比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），A、C、D組與B組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）；晚期凋亡加壞死細(xì)胞分別為（3.36±1.38）%、（80.43±0.61）%、（7.8±0.61）%、（4.12±0.44）%，A、C、D組與B組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C組高于A組、D組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。掃描電鏡提示隨著細(xì)胞在PVDF材料種植時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞逐漸增多并向材料的纖維空隙向深層張入。 結(jié)論 1.中性蛋白酶II型可以完整的分離出陰道上皮層，兩步酶消化法獲得純度較高的陰道上皮細(xì)胞。 2.PVDF材料對(duì)于L929細(xì)胞及hVECs無(wú)細(xì)胞毒性。 3.hVECs較L929細(xì)胞對(duì)盆底材料的毒性更加敏感性。
【關(guān)鍵詞】：靜電紡絲 聚偏二氟乙烯材料 L929細(xì)胞 人陰道上皮細(xì)胞 生物相容性 體外細(xì)胞毒性
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R318.08;R711.5
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• Abstract6-10
• 目錄10-11
• 中英文縮略詞表11-12
• 前言12-16
• 1 人工合成補(bǔ)片在女性盆底功能障礙性疾病中的應(yīng)用12-14
• 2 電紡PVDF材質(zhì)補(bǔ)片的特點(diǎn)14-15
• 3 體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞15-16
• 第一章 PVDF 補(bǔ)片對(duì) L929 細(xì)胞體外細(xì)胞毒性研究16-26
• 1 材料與方法16-20
• 2 結(jié)果20-23
• 3 討論23-26
• 第二章 VECs 與聚偏二氟乙烯材質(zhì)補(bǔ)片的體外細(xì)胞毒性研究26-37
• 1 材料與方法26-30
• 2 結(jié)果30-34
• 3 討論34-37
• 全文結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 附圖42-43
• 在學(xué)期間發(fā)表論文43-44
• 致謝44

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 李亞蘭;張曉紅;王建六;魏麗惠;;補(bǔ)片在盆腔器官脫垂全盆底重建術(shù)中應(yīng)用的初步臨床分析[J];中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志;2008年02期

2 羅新;王曉玉;沈媛;蔣學(xué)風(fēng);李瑞滿;帥翰林;馬雪楓;謝靜燕;李玉娟;;Prolift網(wǎng)片聯(lián)合尿道中段懸吊治療POP或合并SUI患者的近期療效[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展;2009年04期

3 張紅;;醫(yī)用補(bǔ)片在女性盆底重建的可行性和有效性[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年21期

4 林紅賽;王春仁;王志杰;張華;;生物材料的細(xì)胞生物相容性評(píng)價(jià)方法的研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)療器械信息;2011年09期

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  本文關(guān)鍵詞：基于3D打印技術(shù)的新型電紡聚偏二氟乙烯材質(zhì)補(bǔ)片體外細(xì)胞毒性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：371440