發(fā)布時間：2022-07-09 19:13

　　目的建立旋轉(zhuǎn)細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)（Rotary Cell Culture System,RCCS）,探究動態(tài)力學(xué)刺激下血小板裂解液（Platelet lysate,PL）復(fù)合國產(chǎn)多孔鉭對成骨細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)以及成骨細(xì)胞分化的影響。方法1大體和顯微鏡下觀察多孔鉭形態(tài)特征。2采用反復(fù)凍融法制備血小板裂解液,用PL修飾國產(chǎn)多孔鉭,并觀察細(xì)胞-多孔鉭復(fù)合物生長狀態(tài)。3 CCK-8法篩選PL最佳體積分?jǐn)?shù)。4實驗分組:MG63細(xì)胞組（A組）,MG63細(xì)胞+多孔鉭組（B組）,MG63細(xì)胞+多孔鉭+動態(tài)培養(yǎng)組（C組）,MG63細(xì)胞+血小板裂解液+多孔鉭組（D組）,MG63細(xì)胞+血小板裂解液+多孔鉭+動態(tài)培養(yǎng)組（E組）。5用ELISA法檢測各組細(xì)胞成骨因子表達(dá)情況。6用Western blot法檢測成骨因子表達(dá)情況。7檢測各組細(xì)胞中堿性磷酸酶活性和鈣離子含量。8檢測動態(tài)組和靜態(tài)組乳酸和葡萄糖含量。結(jié)果1多孔鉭金屬材料為圓片狀金屬,直徑約為1.5cm,厚度約為0.2cm,外觀為灰色,呈現(xiàn)金屬光澤,表面呈凹凸不平狀,可見很多細(xì)小顆粒,掃描電鏡下觀察可見細(xì)小顆粒構(gòu)成的蜂窩狀微孔結(jié)構(gòu),各個孔隙之間相互聯(lián)通,孔徑大小均勻... 

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
引言
第1章 實驗研究
    1.1 材料與方法
        1.1.1 實驗材料
        1.1.2 主要實驗試劑
        1.1.3 主要實驗儀器
        1.1.4 主要試劑的配置
        1.1.5 多孔鉭的大體和微觀觀察
        1.1.6 MG63細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定
        1.1.7 MG63細(xì)胞和多孔鉭支架復(fù)合培養(yǎng)
        1.1.8 鬼筆環(huán)肽染色MG63細(xì)胞和多孔鉭材料復(fù)合物
        1.1.9 血小板裂解液的制備
        1.1.10 CCK-8法篩選血小板裂解液最佳體積分?jǐn)?shù)
        1.1.11 血小板裂解液與MG63細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)
        1.1.12 實驗分組
        1.1.13 ELISA 法檢測成骨細(xì)胞COL-1、RUNX2、OPN表達(dá)情況
        1.1.14 Western blot法檢測成骨細(xì)胞COL-1、RUNX2、OPN表達(dá)情況
        1.1.15 堿性磷酸酶試劑盒檢測ALP活性情況
        1.1.16 鈣離子檢測試劑盒檢測鈣離子含量情況
        1.1.17 動態(tài)和靜態(tài)培養(yǎng)中乳酸/葡萄糖含量情況
        1.1.18 統(tǒng)計學(xué)分析
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 國產(chǎn)多孔鉭材料大體和微觀結(jié)構(gòu)以及細(xì)胞轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)裝置
        1.2.2 MG63細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        1.2.3 熒光顯微鏡觀察鬼筆環(huán)肽染色MG63細(xì)胞和多孔鉭材料復(fù)合
        1.2.4 血小板裂解液最佳體積分?jǐn)?shù)篩選
        1.2.5 ELISA法檢測成骨因子的表達(dá)結(jié)果
        1.2.6 Western blot法檢測成骨因子表達(dá)結(jié)果
        1.2.7 堿性磷酸酶活性檢測結(jié)果
        1.2.8 鈣離子檢測結(jié)果
        1.2.9 各組細(xì)胞乳酸、葡萄糖檢測結(jié)果
    1.3 討論
        1.3.1 MG63細(xì)胞與多孔鉭共生長情況良好
        1.3.2 PL對成骨過程具有增強作用
        1.3.3 動態(tài)培養(yǎng)和PL對MG63細(xì)胞復(fù)合多孔鉭能增強成骨基因表達(dá)
        1.3.4 動態(tài)培養(yǎng)能夠改善細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境
    1.4 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
結(jié)論
第2章 綜述 基因治療骨關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展
    2.1 關(guān)節(jié)炎的病理機制
    2.2 基因治療的概念
    2.3 基因治療的策略
        2.3.1 軟骨損傷相關(guān)目的基因的選擇
        2.3.2 基因治療的靶細(xì)胞
        2.3.3 導(dǎo)入基因的表達(dá)載體
        2.3.4 基因的遞送方式
    2.4 基因的組合治療和RNA技術(shù)
    2.5 總結(jié)與展望
    參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]骨組織工程多孔生物支架設(shè)計研究進(jìn)展[J]. 屈華偉,韓振宇,卓越,富宏亞.  機械工程學(xué)報. 2019(15)
[2]多孔金屬骨組織支架的研究進(jìn)展[J]. 楊伽捷,朱裕昌,楊春喜.  實用骨科雜志. 2018(02)
[3]TGF-β and BMP signaling in osteoblast,skeletal development,and bone formation,homeostasis and disease[J]. Mengrui Wu,Guiqian Chen,Yi-Ping Li.  Bone Research. 2016(01)

博士論文
[1]靜/動態(tài)培養(yǎng)模式對CIK細(xì)胞體外擴增與代謝特性的影響及其機制[D]. 張偉偉.華東理工大學(xué) 2019
[2]含鉭殼聚糖支架在骨質(zhì)疏松性骨缺損修復(fù)中的應(yīng)用研究[D]. 王安.中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué) 2018
[3]組織工程人工骨修復(fù)兔下頜骨缺損的實驗研究[D]. 王婷.中國醫(yī)科大學(xué) 2018
[4]周期性動態(tài)壓力對成骨細(xì)胞CLC-3離子通道影響的機制研究[D]. 王大維.河北醫(yī)科大學(xué) 2017
[5]可注射細(xì)胞微球明膠復(fù)合物聯(lián)合血小板裂解液在牙組織工程中的應(yīng)用研究[D]. 陳博.第四軍醫(yī)大學(xué) 2015



本文編號：3657663