目的:腫瘤、外傷、炎癥是導(dǎo)致骨缺損的三個(gè)最主要因素。每年在全世界范圍內(nèi),骨缺損的患者在不斷地增加。而當(dāng)前臨床中,對(duì)于骨缺損修復(fù)重建的各種方法明顯地存在不足之處。自體骨移植雖然一直被看作是移植修復(fù)方法的“金標(biāo)準(zhǔn)”,但是它所造成的供區(qū)損傷和出血、畸形、感染以及術(shù)后的慢性疼痛和運(yùn)動(dòng)障礙仍得不到很好的解決。同種異體骨移植取材困難并易發(fā)免疫排斥反應(yīng),同時(shí)也存在感染病原菌的風(fēng)險(xiǎn)�；谝陨蠁�(wèn)題,組織工程化骨為骨缺損的修復(fù)重建開(kāi)辟出了新的思路及方法,并已經(jīng)成為目前熱門(mén)的研究課題。組織工程骨的構(gòu)建的核心問(wèn)題是支架的構(gòu)建。目前已不僅僅對(duì)支架的生物材料進(jìn)行研究,而是從廣義的角度提出了,支架的構(gòu)建除需要生物基質(zhì)材料組織相容性良好,降解性、孔隙率、可塑性、力學(xué)強(qiáng)度、傳導(dǎo)性以及誘導(dǎo)性理想外,還需要同期負(fù)載一種或多種生長(zhǎng)因子以及理想的干細(xì)胞。本次實(shí)驗(yàn)當(dāng)中,我們選用了膠原（COL）及納米羥基磷灰石（n HAP）兩種材料作為支架構(gòu)建的生物基質(zhì)材料。并在支架的構(gòu)建中負(fù)載堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）和骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）。同時(shí)選擇兔的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）作為廣義支架構(gòu)建的干細(xì)胞。通過(guò)廣義的復(fù)合支... 

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分：三維nHAP/COL支架的表征與體外生物相容性的研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 構(gòu)建nHAP/COL支架
        2.3 SEM觀察
        2.4 支架孔隙率的測(cè)定
        2.5 膨脹率、吸水率的測(cè)定
        2.6 機(jī)械性能測(cè)試
        2.7 降解性分析
        2.8 體外生物相容性檢測(cè)
            2.8.1 細(xì)胞接種
            2.8.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            2.8.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞早期粘附情況
            2.8.4 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖
            2.8.5 ALP活性檢測(cè)
        2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 nHAP/COL支架的大體觀察
        3.2 掃描電鏡觀察支架表面形貌
        3.3 機(jī)械性能
            3.3.1 孔隙率、膨脹率與吸水率
            3.3.2 壓縮強(qiáng)度及壓縮模量
        3.4 降解性能
            3.4.1 SEM觀察
            3.4.2 降解液的PH值測(cè)定
            3.4.3 降解率的測(cè)定
        3.5 體外生物相容性的檢測(cè)
            3.5.1 細(xì)胞形態(tài)觀察
            3.5.2 BMSCs粘附率的測(cè)定
            3.5.3 nHAP-COL支架促進(jìn)BMSCs的增殖
            3.5.4 ALP的活性測(cè)定
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分：bFGF復(fù)合BMP-2雙因子修飾的nHAP/COL支架與BMSCs共同培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 構(gòu)建bFGF/BMP-2/nHAP/COL支架
            2.2.1 大鼠鼠尾膠原的提取
            2.2.2 bFGF、BMP-2、COL、nHAP共同凍干構(gòu)建雙因子復(fù)合支架
        2.3 測(cè)試bFGF、BMP-2在bFGF/BMP-2/nHAP/COL支架中的釋放
        2.4 大鼠BMSCs的分離、培養(yǎng)、傳代
        2.5 流式細(xì)胞檢測(cè)法鑒定BMSCs
        2.6 大鼠BMSCs與bFGF/BMP-2/nHAP/COL支架的復(fù)合培養(yǎng)
        2.7 大鼠BMSCs形態(tài)的觀察
        2.8 大鼠BMSCs于支架上粘附情況的測(cè)定
        2.9 CCK-8法檢測(cè)BMSCs在支架上的增殖情況
        2.10 ALP法檢測(cè)BMSCs在支架上的分化情況
        2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 支架的大體形態(tài)及SEM圖像
        3.2 bFGF、BMP-2的釋放情況
        3.3 大鼠BMSCs形態(tài)
        3.4 大鼠BMSCs的流式細(xì)胞學(xué)鑒定
        3.5 大鼠BMSCs與bFGF/BMP-2/nHAP/COL支架共培養(yǎng)證實(shí)了支架的良好組織相容性
        3.6 雙因子釋放更有效的促進(jìn)大鼠BMSCs的粘附
        3.7 雙因子釋放更有效的促進(jìn)大鼠BMSCs的增殖
        3.8 雙因子釋放更有效的促進(jìn)大鼠BMSCs的分化
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分：bFGF復(fù)合BMP-2雙因子修飾的nHAP/COL支架修復(fù)兔下頜骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2 主要試劑和儀器設(shè)備
            2.2.1 主要試劑
            2.2.2 主要儀器設(shè)備
        2.3 兔BMSCs的培養(yǎng)及傳代
        2.4 兔BMSCs的鑒定
            2.4.1 茜素紅染色法
            2.4.2 礦化結(jié)節(jié)染色(VonKossa改良法)
        2.5 兔BMSCs的支架接種
        2.6 兔下頜骨缺損模型的制備及支架植入
        2.7 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的觀察
            2.7.1 動(dòng)物術(shù)后狀態(tài)觀察
            2.7.2 術(shù)后3D-CT觀察下頜骨缺損區(qū)
            2.7.3 游離下頜骨標(biāo)本大體觀察
            2.7.4 HE染色切片觀察
        2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 兔BMSCs誘導(dǎo)成骨-茜素紅染色后的鈣結(jié)節(jié)觀察
            3.1.1 VonKossa染色礦化結(jié)節(jié)觀察
        3.2 術(shù)后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的大體觀察情況
        3.3 術(shù)后3D-CT檢查結(jié)果
        3.4 術(shù)后游離下頜骨缺損區(qū)的大體觀察
        3.5 HE染色切片觀察結(jié)果
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]Calcitonin and vitamin D3 have high therapeutic potential for improving diabetic mandibular growth[J]. Mona A Abbassy,Ippei Watari,Ahmed S Bakry,Takashi Ono,Ali H Hassan.  International Journal of Oral Science. 2016(01)
[3]羥基磷灰石復(fù)合材料制備技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 張琦,浦益瓊,王冰,張彤,吳佩穎.  中成藥. 2015(12)
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本文編號(hào)：3646031