發(fā)布時間：2022-01-22 20:17

　　不可控出血是造成戰(zhàn)傷死亡、意外死亡和外科手術(shù)死亡的重要原因,理想的止血材料對減少出血致死十分重要。自組裝多肽RADA-16（RADARADARADARADA）是化學(xué)合成的一種小肽。1%的RADA-16溶液（w/v）接觸出血創(chuàng)面后,迅速自組裝成網(wǎng)狀納米纖維屏障,可在15s內(nèi)終止成年倉鼠腦、脊髓、股動脈、肝等部位的創(chuàng)傷出血。已被美國麻省理工學(xué)院下屬公司開發(fā)為止血產(chǎn)品。由于來源依賴合成,純化困難,價格昂貴,目前僅用于腦外科手術(shù),應(yīng)用范圍和受惠人群極大受限。解決該問題的關(guān)鍵在于降低RADA-16的生產(chǎn)成本�；蚬こ叹l(fā)酵是目前低成本獲取藥用蛋白的首選方法。但是,RADA-16相對而言分子量偏低,穩(wěn)定性太差而難以獲得理想的表達(dá)水平。因此提高RADA-16在宿主細(xì)胞中的穩(wěn)定性是實現(xiàn)基因工程法生產(chǎn)RADA-16的關(guān)鍵,而將RADA-16與其他蛋白融合表達(dá)有利于提高其表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定性。類彈性蛋白是基于天然牛彈性蛋白序列中高頻出現(xiàn)的短小重復(fù)序列VPGXG（X是Pro以外的任何一種氨基酸）,利用過基因重組技術(shù)得到的一種多肽,具有天然彈性蛋白的部分活性,已被應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)、組織修復(fù)、藥物緩釋和標(biāo)簽純化蛋白。本... 

【文章來源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ITC純化示意圖

圖 3 pMD19-T-hELP36R 的 BamHI & XhoI 雙酶切檢測結(jié)果圖 3 附注：M：DL5000；1：pMD19-T-hELP36 酶切產(chǎn)物；2-5：1，2，3，4 號 pMD19-T-hELP36R酶切產(chǎn)物；6-9：1，2，3，4 號 pMD19-T-hELP36R 質(zhì)粒 DNA。從圖 3 可以看出，經(jīng) BamHI & XhoI 雙酶切處理，pMD19-T-hELP36 被水解成單的一條帶，來自 4 個轉(zhuǎn)化克隆的重組質(zhì)粒被 BamHI & XhoI 雙酶切后，均被水解成片段，其中一個片段與 pMD19-T-hELP36 水解產(chǎn)物大小一致，另外一個片段很小，近 100bp，而該片段在相同上樣量的 pMD19-T-hELP36 質(zhì)粒 DNA 樣品中并未出現(xiàn)見圖 3），初步說明 RADA16 編碼基因插入到 pMD19-T-hELP36 的 BamHI 與 XhoI點之間，該結(jié)果經(jīng)隨后的序列分析得到了進(jìn)一步確證（見圖 4）。

mHI & XhoI 雙酶切處理，pMD隆的重組質(zhì)粒被 BamHI & XhMD19-T-hELP36 水解產(chǎn)物大小一上樣量的 pMD19-T-hELP36 質(zhì)16 編碼基因插入到 pMD19-T-h列分析得到了進(jìn)一步確證（見pMD19-T-hELP36-RADA16 序列測定 的構(gòu)建

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3602835